ChromaLink^??Biotin是目前最先進(jìn)的蛋白質(zhì)生物素化試劑。其特征在于琥珀酰亞胺酯官能團(tuán)(a)，其修飾水性緩沖液中的蛋白質(zhì)賴氨酸殘基。該接頭是紫外線可追蹤的(b)，在354nm處有最高吸收峰。這種紫外信號(hào)允許通過(guò)無(wú)損測(cè)量(A280/A354nm)對(duì)摻入的生物素(c)進(jìn)行快速定量。接頭具有延伸的PEG3間隔區(qū)(d)，有助于保持和維持鏈霉親和素/生物素的親和力。

圖1. ChromaLink^??Biotin的結(jié)構(gòu)

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用ChromaLink^??Biotin標(biāo)記蛋白質(zhì)消除了通常用于定量生物素?fù)饺氲姆爆嵸M(fèi)時(shí)的HABA測(cè)定的需要。相反，生物素的摻入通過(guò)簡(jiǎn)單的分光光度測(cè)量在兩個(gè)波長(zhǎng)下定量(A280 / A354)。典型的標(biāo)記結(jié)果在圖2中通過(guò)四個(gè)樣品的光譜重疊掃描來(lái)說(shuō)明。如圖所示，牛IgG (100微升@ 5mg/ml)用ChromaLink^??Biotin標(biāo)記為0、5、10和15mol。光譜分析說(shuō)明了生物素?fù)饺氲目梢暬投渴嵌嗝慈菀住?/span>

圖2.?用ChromaLink^??Biotin標(biāo)記的牛IgG重疊光譜。使用了各種生物素-蛋白質(zhì)摩爾質(zhì)量(5X，10X和15X)。注意354nm處的紫外信號(hào)表明生物素的摻入。所有光譜都在分子動(dòng)力學(xué)光譜儀上掃描(220-420nm)。

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