支原體是最小和最簡(jiǎn)單的自我復(fù)制生命體。由于支原體體積?。?00 nm),缺乏剛性的細(xì)胞壁,因此肉眼無(wú)法檢測(cè)到支原體,它們可以透過(guò)一般過(guò)濾膜,并對(duì)很多抗生素都具有抵抗力。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)主要問(wèn)題,不止影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性,更會(huì)影響細(xì)胞工程制藥的質(zhì)量和安全性。
支原體的特征:
支原體屬于柔膜菌綱,其成員特征為缺乏細(xì)胞壁以及擁有多變的形態(tài)。支原體對(duì)包括原代細(xì)胞在內(nèi)的所有真核細(xì)胞類型具有高度傳染性。成百上千的支原體可以附著在一個(gè)細(xì)胞上,與細(xì)胞膜融合、繁殖,最終數(shù)量可以超過(guò)培養(yǎng)細(xì)胞1000倍。支原體可以徹底改變細(xì)胞特性和扭曲研究結(jié)果。而支原體脂蛋白可被Toll樣受體2(TLR2)識(shí)別并激活免疫細(xì)胞。支原體沒(méi)有細(xì)胞壁的特點(diǎn)使它們對(duì)常用的抗生素(如青霉素和鏈霉素)產(chǎn)生抗性。此外,它們的尺寸微?。▇100nm),能夠穿透過(guò)0.2μm的標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾膜。因此,我們需要采取預(yù)防措施來(lái)防止細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。
支原體污染對(duì)細(xì)胞功能的主要影響:
支原體與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)素和代謝物前體。因此,它們能改變?cè)S多細(xì)胞功能,影響到細(xì)胞代謝和細(xì)胞生長(zhǎng),最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。通過(guò)對(duì)受污染的人源細(xì)胞進(jìn)行微陣列分析,科學(xué)家發(fā)現(xiàn)支原體嚴(yán)重影響數(shù)百個(gè)基因的表達(dá),當(dāng)中包括受體、離子通道、生長(zhǎng)因子和致癌基因。一旦與宿主細(xì)胞膜粘附或融合,支原體可以通過(guò)干擾信號(hào)級(jí)聯(lián)和細(xì)胞因子產(chǎn)生,進(jìn)一步損害細(xì)胞。這些有害效應(yīng)會(huì)強(qiáng)烈干擾實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),導(dǎo)致研究結(jié)果無(wú)效,特別是當(dāng)涉及表達(dá)TLR2的免疫細(xì)胞時(shí),如巨噬細(xì)胞。
檢測(cè)支原體的 5 大原因:
1.珍貴細(xì)胞系的損失
2.對(duì)數(shù)據(jù)可靠性和再現(xiàn)性的嚴(yán)重影響
3.大多數(shù)學(xué)術(shù)期刊都要求進(jìn)行測(cè)試
4.全球高達(dá)35%的污染率,包括細(xì)胞庫(kù)
5.時(shí)間和金錢的損失
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