支原體是最小和最簡單的自我復制生物，其中一些可以在人類中致病，例如導致肺炎。雖然它們是細胞培養(yǎng)物的常見污染物，但這種污染在培養(yǎng)物中不容易找到可見的跡象，因為支原體可以粘附在細胞表面，而不會殺死細胞和導致培養(yǎng)基混濁。它們也很小，用光學顯微鏡觀察不到。此外，目前的支原體檢測方法大多費時費力。最近，Japanese cell bank?驗證了由InvivoGen開發(fā)的基于等溫PCR的支原體快速檢測試劑盒MycoStrip的有效性，并將其檢測靈敏度與其他檢測方法進行了比較。實驗中，將M. hyorhinis支原體(NBRC 14858)加入到VERO細胞(JCRB0111)中進行培養(yǎng)，稀釋后的樣品分別用MycoStrip、生物發(fā)光法（Bioluminescence assay）、熒光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR進行檢測。經(jīng)證實，MycoStrip的靈敏度與熒光染色的靈敏度相當，顯示出足夠的檢測效率證明了基于等溫PCR的MycoStrip是一種簡單且高度通用的支原體檢測方法，因為該檢測方法不需要特殊設(shè)備，將試劑與樣品混合并滴在試紙上即可輕松快速地獲得結(jié)果。MycoStrip可普遍用于支原體污染的常規(guī)檢測。
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圖1. MycoStrip檢測步驟與結(jié)果展示
圖2. 與MycoStrip做比較的3種其他支原體檢測方法
檢測結(jié)果
圖3. MycoStrip檢測結(jié)果。在高達60倍的稀釋度下檢測到支原體污染，與熒光染色法的靈敏度相同。
圖4. 熒光染色法檢測結(jié)果。在高達60倍的稀釋度下檢測到支原體污染。
圖5. Nested-PCR檢測結(jié)果。在高達60倍的稀釋度下檢測到支原體污染，在600倍和6000倍稀釋時，檢測到支原體污染的概率為50%。
MycoStrip、生物發(fā)光法（Bioluminescence assay）、熒光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR這4種方法從以下結(jié)果對比可以看出InvivoGen的MycoStrip的靈敏度比MycoAlert高約10倍，MycoAlert是一種生物發(fā)光檢測法，可實現(xiàn)簡單快速(約30分鐘)的檢測。此外，MycoStrip與日本藥典中描述的檢測方法(即熒光染色和Nested-PCR)具有相似的靈敏度。
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rep-mys-10 | MycoStrip? | Mycoplasma Detection Kit | 10 tests |
rep-mys-20 | 20 tests |
rep-mys-50 | 50 tests |
rep-mys-100 | MycoStrip??100 ? | Mycoplasma Detection Kit (without cassette) | 100 tests |
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