細(xì)胞培養(yǎng)中的微生物污染對(duì)于您的研究是一個(gè)嚴(yán)重和持續(xù)性的威脅。支原體、細(xì)菌和真菌的侵入可以殺死或徹底改變細(xì)胞培養(yǎng)，導(dǎo)致災(zāi)難性的結(jié)果，浪費(fèi)時(shí)間和資源。這本手冊(cè)(可聯(lián)系欣博盛生物獲取完整版)幫助您深入了解最有可能侵入您細(xì)胞培養(yǎng)的污染物，建立預(yù)防污染的良好操作規(guī)范，以及提供清除污染的解決方案。作為先天免疫和微生物學(xué)方面的專家，我們清楚知道這些污染物對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的威脅。雖然細(xì)菌和真菌污染一般肉眼可見，但支原體和內(nèi)毒素污染不易被肉眼察覺，亦不會(huì)被一般光學(xué)顯微鏡觀察到明顯的特征變化。這些難以被檢測(cè)到的污染物是一個(gè)嚴(yán)重的問題，因?yàn)樗鼈兛赡軐?dǎo)致數(shù)據(jù)被誤解，許多已發(fā)表的研究可能已被涉及。因此，現(xiàn)在的學(xué)術(shù)期刊經(jīng)常要求投稿作者檢測(cè)細(xì)胞是否存在支原體和內(nèi)毒素污染。此外，對(duì)于開發(fā)未來治療方案的制藥企業(yè)，細(xì)胞污染將嚴(yán)重?fù)p害它們的研究和聲譽(yù)，造成難以負(fù)擔(dān)的后果。在InvivoGen，我們追求卓越，致力為世界各地提供高質(zhì)量的產(chǎn)品和無支原體污染細(xì)胞系。本指南將幫助您解決微生物污染每個(gè)階段的問題，并指導(dǎo)您如何選擇正確的InvivoGen產(chǎn)品來檢測(cè)、清除和預(yù)防污染。

檢測(cè)

防止及去除細(xì)胞污染的關(guān)鍵是盡早發(fā)現(xiàn)污染?；谖⑸镂廴镜男再|(zhì)，檢測(cè)方法包括生物分析、PCR、熒光或化學(xué)染色、光學(xué)顯微鏡、比濁法、pH值測(cè)量或簡(jiǎn)單的目視檢查。細(xì)菌和真菌通?？梢酝ㄟ^光學(xué)顯微鏡識(shí)別。它們生長(zhǎng)迅速，在48小時(shí)內(nèi)（比如經(jīng)過周末）即可達(dá)至肉眼可見的程度，被污染的培養(yǎng)基會(huì)顯得渾濁或呈斑點(diǎn)狀。隨后，這些微生物可以用檢測(cè)試劑盒進(jìn)行鑒定。然而，支原體污染狀態(tài)不能被一般肉眼和光學(xué)顯微鏡觀察到，因此它們可能會(huì)在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)不被注意到，并且只能通過專門的分析法來鑒定。不同的檢測(cè)技術(shù)可以同時(shí)使用，以確保分析準(zhǔn)確，特別是用于排除假陽性或闡明不確定的結(jié)果。

預(yù)防

了解微生物污染源對(duì)于減少細(xì)胞培養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)至關(guān)重要（見下文）。雖然不可能完全消除或隔離污染源，但您可以采取各種措施來預(yù)防污染。首先，確保您是在無菌環(huán)境中工作，并使用適當(dāng)?shù)臒o菌操作技術(shù)。第二，隔離任何從實(shí)驗(yàn)室外帶進(jìn)來的細(xì)胞，直到確認(rèn)沒有污染為止。第三，用光學(xué)顯微鏡和檢測(cè)試劑盒定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞的情況。最后，您可以使用復(fù)合抗生素，例如InvivoGen提供的專為新培養(yǎng)細(xì)胞（原代細(xì)胞或克?。╊A(yù)防難以檢測(cè)的污染而設(shè)的配方。?

清除

一旦在細(xì)胞中檢測(cè)到污染，通常的建議做法是丟棄細(xì)胞和培養(yǎng)基。然而，有時(shí)候我們會(huì)遇到一些不能廢棄的珍貴細(xì)胞（如單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株、來源于移植組織的細(xì)胞系、原代細(xì)胞），而且沒有任何凍存（如尚未制備凍存細(xì)胞）。

在這種情況下，可以使用InvivoGen提供的抗生素，在不損害細(xì)胞的情況下，快速、可靠地清除污染。

實(shí)驗(yàn)室常見微生物污染源

1. 基礎(chǔ)設(shè)施:

通風(fēng)柜、排風(fēng)裝置和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備可以容納表面微生物并傳播空氣微生物。

每天用酒精清潔工作區(qū)和每月用漂白劑清潔工作區(qū)。定期更換所有空氣過濾器，并至少每周清空所有真空吸液器。

2. 操作員：

實(shí)驗(yàn)室工作人員可以將皮膚、衣服和身體上帶有的微生物和灰塵傳播到培養(yǎng)細(xì)胞中。

穿上合適的安全服，使用無菌技術(shù)。

3. 移液槍、槍頭、注射器、

真空泵：受污染的移液槍可以污染多個(gè)細(xì)胞。

使用無菌移液槍、針頭和注射器，不要重復(fù)使用一次性器具。確保定期清空和清潔真空泵儲(chǔ)液罐和管路。

4. 設(shè)備：?

玻璃器皿、培養(yǎng)箱和水浴鍋很容易被污染。

保持所有設(shè)備無菌，經(jīng)常更換水浴鍋中的水（這是真菌的溫床）。定期對(duì)所有培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒。

5. 安全服：

實(shí)驗(yàn)袍和手套必須保持清潔干凈，只能在實(shí)驗(yàn)室穿上跟戴上。

不重復(fù)使用一次性防護(hù)服，用后立即丟棄。

6. 培養(yǎng)基、試劑和細(xì)胞：

使用任何培養(yǎng)基、試劑或細(xì)胞之前，確認(rèn)它們是無菌的。小心密封所有容器。

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