支原體是最小和最簡(jiǎn)單的自我復(fù)制生命體。由于支原體體積?。?00 nm），缺乏剛性的細(xì)胞壁，因此肉眼無(wú)

法檢測(cè)到支原體，它們可以透過(guò)一般過(guò)濾膜，并對(duì)很多抗生素都具有抵抗力。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中的一

個(gè)主要問(wèn)題，不止影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性，更會(huì)影響細(xì)胞工程制藥的質(zhì)量和安全性。

支原體的特征

支原體屬于柔膜菌綱，其成員特征為缺乏細(xì)胞壁以及擁有多變的形態(tài)。支原體對(duì)包括原代細(xì)胞在內(nèi)的所有真核細(xì)胞類型具有高度傳染性。成百上千的支原體可以附著在一個(gè)細(xì)胞上，與細(xì)胞膜融合、繁殖，最終數(shù)量可以超過(guò)培養(yǎng)細(xì)胞1000倍。支原體可以徹底改變細(xì)胞特性和扭曲研究結(jié)果。而支原體脂蛋白可被Toll樣受體2（TLR2）識(shí)別并激活免疫細(xì)胞3。支原體沒(méi)有細(xì)胞壁的特點(diǎn)使它們對(duì)常用的抗生素（如青霉素和鏈霉素）產(chǎn)生抗性。此外，它們的尺寸微?。▇100nm），能夠穿透過(guò)0.2μm的標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾膜。因此，我們需要采取預(yù)防措施來(lái)防止細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。

支原體污染對(duì)細(xì)胞功能的主要影響

支原體與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)素和代謝物前體。因此，它們能改變?cè)S多細(xì)胞功能，影響到細(xì)胞代謝和細(xì)胞生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。通過(guò)對(duì)受污染的人源細(xì)胞進(jìn)行微陣列分析，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)支原體嚴(yán)重影響數(shù)百個(gè)基因的表達(dá)，當(dāng)中包括受體、離子通道、生長(zhǎng)因子和致癌基因4。一旦與宿主細(xì)胞膜粘附或融合，支原體可以通過(guò)干擾信號(hào)級(jí)聯(lián)和細(xì)胞因子產(chǎn)生，進(jìn)一步損害細(xì)胞5。這些有害效應(yīng)會(huì)強(qiáng)烈干擾實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，導(dǎo)致研究結(jié)果無(wú)

效，特別是當(dāng)涉及表達(dá)TLR2的免疫細(xì)胞時(shí)，如巨噬細(xì)胞。

支原體污染的檢測(cè)

InvivoGen提供兩種支原體檢測(cè)方法，令您能夠及時(shí)抵御細(xì)胞污染。兩種試劑均可快速和準(zhǔn)確地檢測(cè)出最常污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體物種。

MycoStrip?是一種能夠“即時(shí)”（?1小時(shí)）檢測(cè)支原體基因組的免疫層析試紙，而PlasmoTest?是基于檢測(cè)支原體脂蛋白的比色細(xì)胞分析法。

基因檢測(cè)試紙條

MycoStrip?

??適合用于即時(shí)測(cè)試

??簡(jiǎn)單：無(wú)需特殊設(shè)備

??快速：實(shí)際操作時(shí)間<15分鐘，總時(shí)長(zhǎng)約1小時(shí)

??清晰：一條條帶 - 支原體陰性?

?兩條條帶 - 支原體陽(yáng)性

MycoStrip?基于等溫PCR的技術(shù)，在加入我們專有的反應(yīng)混合物后，靶向擴(kuò)增細(xì)胞培養(yǎng)中，最常見(jiàn)（占95％）支原體物種的16S rRNA基因。在5分鐘內(nèi)免疫層析試紙條的顯示區(qū)上就會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的條帶。

細(xì)胞比色分析法

PlasmoTest?

??適合常規(guī)測(cè)試使用

??簡(jiǎn)單：使用細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行比色檢測(cè)

??快速：操作時(shí)間<1小時(shí)。過(guò)夜培養(yǎng)后可見(jiàn)結(jié)果

??靈敏：培養(yǎng)上清液中檢測(cè)限為 5.10（2次方） - 5.10（5次方） CFU/ml

InvivoGen擁有專利的HEK-Blue?-2細(xì)胞，穩(wěn)定表達(dá)人源TLR2（支原體脂蛋白的主要識(shí)別受體1

）,以及一個(gè)NF-κB誘導(dǎo)的分泌型胚胎堿性磷酸酶（SEAP）報(bào)告基因。HEK-Blue?-2細(xì)胞可直接在HEK-Blue?檢測(cè)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，便于檢測(cè)，是常規(guī)檢測(cè)的理想選擇。簡(jiǎn)單向這些細(xì)胞添加測(cè)試樣品則可以得到比色結(jié)果，其靈敏度與基于生物化學(xué)發(fā)光的分析法相近。培養(yǎng)上清液樣品中SEAP報(bào)告基因的活性可使用分光光度計(jì)在620-655nm下測(cè)量。而吸光度與污染物的量成正比。為了您的方便，HEK-Blue?-2細(xì)胞會(huì)附送Normocin?。Normocin?是一種抗生素混合物，能夠防止細(xì)胞培養(yǎng)受到支原體、細(xì)菌和真菌的污染。

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