當(dāng)我們做完ELISA實(shí)驗(yàn)，測(cè)完吸光度，數(shù)據(jù)我們應(yīng)該怎么處理呢？標(biāo)準(zhǔn)曲線不是直線應(yīng)該怎么辦？本篇整理了ELISA數(shù)據(jù)處理相關(guān)的知識(shí)，希望能幫助到您。

一、ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線分析步驟

1.標(biāo)曲和樣本孔的每個(gè)孔 450nm 的OD值減去630nm（或570nm）的OD值；

2.再將獲得的標(biāo)曲和樣本孔數(shù)據(jù)分別減去空白孔Blank的OD值；

3.以標(biāo)曲的濃度為橫坐標(biāo)，以上算出的OD值為縱坐標(biāo)，擬合標(biāo)曲（選擇R2值大于0.99的比較好的擬合方式，必要時(shí)可以刪除個(gè)別差異較大的標(biāo)曲點(diǎn)進(jìn)行擬合）；

4.計(jì)算樣本值，將樣本減去空白孔的OD值復(fù)制，選軟件中的“粘貼”，得到的X值再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)就是最終的濃度值。

二、ELISA 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方程

1.直線回歸：直線回歸是最基本、簡(jiǎn)單的回歸分析方法，將所有的測(cè)試點(diǎn)擬合為一條直線，其擬合函數(shù)方程式為：y = a + bx。一般實(shí)際實(shí)驗(yàn)中線性極好的情況下直線回歸可以獲得較為理想的R2值，如果直線擬合不理想，可以考慮三次曲線、logistic曲線（四參數(shù)）等。

2.logistic曲線（四參數(shù)）擬合回歸方程：競(jìng)爭(zhēng)法和夾心法都可以用到。它要求X值不能小于0(因?yàn)橹笖?shù)是實(shí)數(shù),故有此要求)。在很多情況下它都可以擬合ELISA的反應(yīng)曲線,所以它也成了ELISA中應(yīng)用最廣的模型之一。

注：曲線擬合方法雖多，要根據(jù)不同類型ELISA本身的特點(diǎn)，選擇最適合的曲線擬合模型，才能得到最合理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般情況下，需要綜合考慮標(biāo)準(zhǔn)曲線的趨勢(shì)走向以及R2值的大小以及樣本落值情況。

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