產(chǎn)品名稱：Human IL-6 ELISA kit
中文名：人IL-6 ELISA試劑盒
貨號：EHC007
檢測原理:
欣博盛 QuantiCyto? ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法：抗人IL-6單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的人IL-6會與單抗結(jié)合，游離的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-6抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合；抗人IL-6抗體與結(jié)合在單抗上的人IL-6結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，若反應(yīng)孔中有人IL-6，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃。在450 nm處測OD值，人IL-6濃度與OD450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中人IL-6的濃度。
試劑盒組成：
儲存條件：
試驗所需自備試驗器材 (不提供，但可協(xié)助購買) :
1. 酶標(biāo)儀(450 nm波長濾光片)
2. 進(jìn)口品牌高精度加液器及一次性吸頭：0.5-10 ul, 2-20 ul, 20-200ul, 200-1000 ul。
3. 37 ℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水，坐標(biāo)紙等。
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標(biāo)本收集:
1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2. 血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。
3. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
4. 標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20 ℃，-70 ℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測。
5. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。
?注意事項:
1. 試劑盒使用前請保存在2-8 ℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完，請廢棄。
2. 濃縮生物素化抗體，濃縮酶結(jié)合物體積小，運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?，F(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50 ℃）使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
4. 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。請?zhí)崆白稍冃啦┦⑸锟萍加邢薰尽?/p>
5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。
6. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗結(jié)果。
8. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo)本時，請按國家生物試驗室安全防護(hù)條列執(zhí)行。
9. 如果分次使用，請根據(jù)需要量配制各組分，以免配制過多造成浪費(fèi)而影響后續(xù)試驗。剩余板孔請用封板膠紙封住，放回鋁箔袋中,2個月內(nèi)用完。
檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。
2. 用雙蒸水將20×濃縮洗滌液稀釋成1×工作液。未用完的放回4 ℃。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 開蓋前1000rpm離心1min。加入標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液1.0 ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻(濃度為200 pg/ml)。然后根據(jù)需要進(jìn)行稀釋。(建議標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0 pg/ml)。0 pg/ml即空白孔。復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品原液(200 pg/ml）若未用完的請廢棄。
4. 生物素化抗體工作液：按當(dāng)次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將30×濃縮生物素化抗體稀釋成1×工作液。當(dāng)日使用。若實驗次數(shù)過多導(dǎo)致生物素化抗體量不足，可向欣博盛公司單獨購買生物素化抗體。（須提供抗體批號）
5. 酶結(jié)合物工作液：按當(dāng)次試驗所需要的用量，使用前20分鐘，用酶結(jié)合物稀釋液將30×濃縮酶結(jié)合物稀釋成1×工作液。當(dāng)日使用。
若實驗次數(shù)過多導(dǎo)致濃縮酶結(jié)合物量不足，可向欣博盛公司單獨購買濃縮酶結(jié)合物。（須提供酶結(jié)合物批號）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例：
以500 ul/管為例，用標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液將復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品母液進(jìn)行倍比稀釋，具體稀釋方法如下圖，也可根據(jù)實際用量來稀釋，如200 ul/管。
洗滌方法:
1. 自動洗板機(jī)：要求注入的洗滌液為350 ul，注入與吸出間隔30－60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350 ul，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。
操作步驟:
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓實自封條，密封口袋，放回4 ℃。
2．空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液，其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100 ul/孔)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育90分鐘。
3．提前20分鐘準(zhǔn)備生物素化抗體工作液。
4．洗板5次。
5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液(100 ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育60分鐘。
6．提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ℃)放置。
7．洗板5次。
8．空白孔加酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100 ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育30分鐘。
9．打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
10．洗板5次。
11．加入顯色底物(TMB)100 ul/孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育15分鐘。
12．加入反應(yīng)終止液100 ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi))。在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。
13. 實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。
建議保存酶標(biāo)板框，以備下次或者今后試驗使用。
結(jié)果判斷:
1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制
并選取最佳擬合曲線，推薦使用二次多項式方程擬合。通過標(biāo)本
的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
3. 若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
注意：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)本中人IL-6的含量。
靈敏度、特異性和重復(fù)性:
● 靈敏度：最小可測人IL-6達(dá)1.56 pg/ml(8次獨立重復(fù)實驗平均值)。
● 特異性：本試劑盒特異性識別天然和重組人IL-6。與以下細(xì)胞因子等無明顯交叉反應(yīng)。
● 重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
人 IL-6 簡介：
白細(xì)胞介素 6(interleukin 6,IL-6)是一種多功能細(xì)胞因子，由多種細(xì)胞產(chǎn)生，對免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)、造血和神經(jīng)系統(tǒng)有多方面作用。成熟人 IL-6 由 184 個氨基酸組成，與小鼠和大鼠 IL-6 有 39%的氨基酸序列一致性。IL-6 的生物學(xué)活性主要包括 6 個方面：調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)造血系統(tǒng)、誘導(dǎo)急性期蛋白、調(diào)節(jié)腫瘤生長、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)和其它。調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答：誘導(dǎo) B 細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體，誘導(dǎo) T 細(xì)胞表達(dá) IL-2 受體和產(chǎn)生 IL-2，誘導(dǎo) T 細(xì)胞活化增殖和分化、激素，保護(hù)神經(jīng)原抵抗毒 CTL 分化。調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)：誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化、支持細(xì)胞存活，誘導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生性物質(zhì)，促進(jìn)神經(jīng)重建，誘導(dǎo)急性期蛋白，誘導(dǎo)多種急性期蛋白合成和分泌。調(diào)節(jié)造血系統(tǒng)：誘導(dǎo)造血干細(xì)胞生長，誘導(dǎo)巨核細(xì)胞成熟。調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長，促進(jìn)或抑制腫瘤細(xì)胞生長。其它作用包括促進(jìn)中性粒細(xì)胞分化、活化或骨細(xì)胞，促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞、腎小球細(xì)胞生長，誘導(dǎo) ACTH 合成等。IL-6與臨床中許多疾病有著廣泛的聯(lián)系，如呼吸系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和腫瘤等，IL-6 的阻斷將成為針對這些疾病的新型治療策略，例如抗 IL-6R 單抗藥物。
部分文獻(xiàn)引用：
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Jiang Y, Gong H, Jiang S, et al. (2020). Multi-walled carbon nanotubes decrease neuronal NO synthase in 3D brain organoids. Science of The Total Environment.?
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