細(xì)胞凋亡是以細(xì)胞內(nèi)明顯的形態(tài)和生化變化為特征的程序性細(xì)胞死亡過(guò)程。是多細(xì)胞生物確保嚴(yán)重受損或突變細(xì)胞被清除的一個(gè)基本過(guò)程。這對(duì)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、發(fā)育和癌癥中可能受損至關(guān)重要。我們有易于使用的凋亡試劑盒、膜聯(lián)蛋白V試劑和針對(duì)常見凋亡標(biāo)記物的抗體來(lái)確定細(xì)胞凋亡水平。

Annexin V

原理：在細(xì)胞凋亡的早期階段，質(zhì)膜被重新排列，導(dǎo)致細(xì)胞膜磷脂不對(duì)稱性的改變。這些重排的作用之一是在外質(zhì)膜上顯示磷脂酰絲氨酸（PS）。在健康、靜止的細(xì)胞中，PS僅位于內(nèi)膜上，因此PS暴露是早期凋亡的跡象。膜聯(lián)蛋白V在Ca2+存在下對(duì)PS具有高結(jié)合親和力，因此是檢測(cè)凋亡細(xì)胞的常用工具。

絲氨酸蛋白酶激活在細(xì)胞凋亡、腫瘤惡性程度以及乳腺癌、頭頸癌的診斷指標(biāo)中起著重要作用。

我們的熒光標(biāo)記絲氨酸蛋白酶抑制劑（FLISP）試劑盒允許檢測(cè)活細(xì)胞中絲氨酸蛋白酶的細(xì)胞內(nèi)糜蛋白酶樣活性。細(xì)胞內(nèi)的活性糜蛋白酶樣酶與熒光團(tuán)（FAM）標(biāo)記的FLISP抑制劑探針共價(jià)結(jié)合，在細(xì)胞內(nèi)保留綠色熒光信號(hào)。細(xì)胞內(nèi)活性糜蛋白酶樣酶的濃度越高，觀察到的熒光水平越高。FLISP試劑盒還包含碘化丙啶，用于流式細(xì)胞術(shù)鑒定死亡細(xì)胞，以及Hoechst 33342用于熒光顯微鏡下的核標(biāo)記。

Active chymotrypsin-like serine protease activity staining by flow cytometry. Jurkat cells were treated as shown with 1mM staurosporine to induce apoptosis. The cells were then stained using the FLISP FAM-Phe-DAP Serine Protease Assay Kit including propidium iodide (APO009). Apoptotic cells positive for serine protease activity can be seen in the bottom right quadrant and dead cells positive for both serine protease and PI in the top right quadrant. Healthy cells are negative for both stains. Data acquired on the ZE5? Cell Analyzer.

Cathepsin Kits

該試劑盒能夠檢測(cè)溶酶體中包含的活性組織蛋白酶，它們參與自噬途徑和吞噬作用。當(dāng)釋放到細(xì)胞質(zhì)中時(shí)，它們可以調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性和外源性途徑。組織蛋白酶家族由幾種儲(chǔ)存在稱為溶酶體的細(xì)胞器中的蛋白水解酶組成。

這也是涉及溶酶體的細(xì)胞自噬的關(guān)鍵途徑，這是細(xì)胞自我消化的過(guò)程。

Fig. 5. Cathepsin B staining in HeLa cells. HeLa cells were stained with Magic Red Cathepsin B Kit (ICT937) using Hoechst as a counterstain. A, Hoechst. B, Magic Red Cathepsin B. C, overlay.

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