細(xì)胞周期Cell cycle是指從一次細(xì)胞分裂形成子細(xì)胞開(kāi)始到下一次細(xì)胞分裂形成子細(xì)胞為止所經(jīng)歷的過(guò)程,反映細(xì)胞增殖的速度。
一個(gè)完整的細(xì)胞周期包含間期和分裂期(M期)兩個(gè)階段。間期又分為DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)和DNA合成后期(G2期),處于不同時(shí)期的細(xì)胞的DNA含量存在差異。一般認(rèn)為,G1期細(xì)胞具有增殖活性,參與細(xì)胞周期循環(huán),是二倍體細(xì)胞;S期細(xì)胞,DNA 含量逐漸增加,從二倍體變成四倍體,隨后進(jìn)入G2期,最終進(jìn)入M期。研究表明,細(xì)胞周期檢測(cè)分析對(duì)人腫瘤的診斷預(yù)后具有很高的價(jià)值。
檢測(cè)細(xì)胞周期常用的方法是檢測(cè)DNA含量,可以選擇能與DNA結(jié)合的熒光染料(如PI等),再根據(jù)細(xì)胞各個(gè)時(shí)期DNA含量不同從而熒光強(qiáng)度不同的方法,分析各個(gè)階段的細(xì)胞比例。
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流式細(xì)胞術(shù) / 細(xì)胞周期檢測(cè)
當(dāng)天檢測(cè)的活細(xì)胞樣本
( 1 ) 收集2×105 - 1×106個(gè)細(xì)胞,離心棄上清。用PBS洗滌一次,離心棄上清。
( 2 ) 加入1mL DNA staining solution和10μL Permeabilization solution,渦旋振蕩5 - 10秒混勻。室溫避光孵育30分鐘。
( 3 ) 選擇最低上樣速度,在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測(cè)。如需在熒光顯微鏡下觀察,則離心細(xì)胞,棄上清,加入新鮮緩沖液重懸。滴加1滴細(xì)胞懸液至載玻片,蓋上蓋玻片后使用合適的濾光片進(jìn)行觀察。
當(dāng)天無(wú)法檢測(cè)的活細(xì)胞樣本
( 1 ) 按照下述方法固定,或其他合適的方法固定
(a) 收集2×105 - 1×106個(gè)細(xì)胞,離心棄上清。輕彈管壁,使沉淀重懸在殘余的液體中,加入1 mL 室溫下的PBS。
(b) 將細(xì)胞緩慢加入3 mL無(wú)水乙醇(- 20℃預(yù)冷)中,邊加邊高速攪拌。- 20℃固定過(guò)夜,可保存數(shù)月。
( 2 ) 檢測(cè)當(dāng)天,將固定細(xì)胞離心,棄去乙醇,輕彈管壁使沉淀松散,加入2 - 5 mL 室溫下的PBS,放置15分鐘使細(xì)胞再次水化。離心,棄上清。
( 3 ) 加入1 mL DNA staining solution,渦旋振蕩5 - 10秒混勻。室溫避光孵育30分鐘。
( 4 ) 選擇最低上樣速度,在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測(cè)。如需在熒光顯微鏡下觀察,則離心細(xì)胞,棄上清,加入新鮮緩沖液重懸。滴加1滴細(xì)胞懸液至載玻片,蓋上蓋玻片后使用合適的濾光片進(jìn)行觀察。
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