細(xì)胞周期檢測五個小知識點(diǎn)匯總整理:
1、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的原理
在細(xì)胞周期的不同時期,DNA含量存在差異,用DNA染料進(jìn)行染色(如應(yīng)用最廣泛的染料PI),DNA含量多,熒光強(qiáng)度高,DNA含量少,熒光強(qiáng)度低,因此可以根據(jù)DNA熒光強(qiáng)度的變化,來判斷細(xì)胞處于哪個時期。
2、利用PI分析細(xì)胞周期,需要加入RNase消除RNA的影響
PI是通過插入雙螺旋結(jié)構(gòu)中疊加在一起的堿基對核酸進(jìn)行染色的,并且它可以插入所有DNA和RNA的雙鏈區(qū),PI不是DNA特異性的,所以需要加入RNase消除RNA的影響。
3、細(xì)胞周期檢測時,一定不要洗滌
不同于蛋白染料和細(xì)胞之間的牢固結(jié)合,DNA與染料的結(jié)合是一種結(jié)合態(tài)和游離態(tài)之間松散的平衡,不是很牢固,所以洗滌步驟會造成染料丟失,降低核酸的特異性熒光,造成測量值變小,因此,DNA染色時一定不要洗滌。
4、 固定細(xì)胞和活細(xì)胞的細(xì)胞周期檢測
PI、7-AAD、TOTO-3和YOYO-1等染料不能透過完整的細(xì)胞膜,在染色時,一般需要用70%乙醇固定、通透細(xì)胞膜,從而使這些染料進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與DNA結(jié)合,所以市面上很多的細(xì)胞周期檢測試劑盒都是需要固定細(xì)胞的;如果想要檢測活細(xì)胞樣本,可以咨詢我們在線客服人員。
5、其他應(yīng)該注意的問題
? 儀器:定期清洗噴嘴,激光預(yù)熱時間充分,低流速進(jìn)樣等。
? 樣本:消化要充分,但不能過度,保證細(xì)胞不粘連、不破裂,染色要充分等。
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