小鼠：選擇一種品系的小鼠
DBA/1 (DBA)小鼠 或 C57BL/6 (B6)小鼠
l? 7-8周小鼠
l? SPF級動物房
l? 高脂飲食
推薦佐劑和膠原蛋白：選擇1種佐劑+ 1種膠原蛋白
貨號 | 佐劑 |
| 貨號 | 骨膠蛋白 |
7002 | Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) (DBA - Booster only) |
| 20011 | Chick Type II Collagen, Lyophilized (DBA or B6) |
7008 | Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 1 mg/ml (DBA) |
| 20012 | Chick Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA or B6) |
7001 | Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 4 mg/ml (DBA) |
| 20021 | Bovine Type II Collagen, Lyophilized (DBA) |
7023 | Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 5 mg/ml (B6) |
| 20022 | Bovine Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA) |
免疫方案
方案1: 單一免疫 (DBA mice)
Day 0: 皮下注射:膠原乳劑加CFA: 4mg /ml結(jié)核分枝桿菌
Day 0 - 28: 每7天給關(guān)節(jié)炎評分
Day 28 - 56: 每2-3天給關(guān)節(jié)炎評分：關(guān)節(jié)炎發(fā)病率90 - 100%
Day 56: 實驗結(jié)束。
或
方案 2: 加強(qiáng)免疫
Day 0: 皮下注射:含CFA的膠原乳劑:1mg /ml (DBA)或5mg /ml結(jié)核分枝桿菌(B6)
Day 0 - 28: 每7天給關(guān)節(jié)炎評分
Day 21: 皮下注射(加強(qiáng)劑):膠原乳劑配合IFA (DBA)或CFA：5mg /ml結(jié)核分枝桿菌(B6)
Day 28 - 56: 每2-3天給關(guān)節(jié)炎評分：關(guān)節(jié)炎發(fā)病率90 - 100% (DBA)，50-70% (B6)
Day 56: 實驗結(jié)束。
用勻漿器準(zhǔn)備乳劑：不要使用兩個注射器方法
步驟*:
1. 準(zhǔn)備材料 (圖1. Homogenizer blade漿式勻漿器 (a), 帶有三通旋塞的10mL注射器 (b) 和1 ml Hamilton 注射器 (c)).
2. 鎖開關(guān)。
3. 保持在冰上(圖2)。
4. 注射器中加入CFA。
5. 逐滴滴入等量的膠原蛋白溶液(圖3)。
6. 以10,000 - 30,000 rpm混合2分鐘。攪拌時，上下移動注射器。
7. 將注射器放入冰中冷卻5分鐘。
8. 以10,000 - 30,000 rpm混合2分鐘。攪拌時，上下移動注射器。
9. 用乳滴試驗評價乳劑
10. 用三通旋塞將乳劑轉(zhuǎn)移到Hamilton注射器中。
乳滴聚結(jié)實驗
免疫：
注射器中的乳劑 (沒有氣泡!)? (b) 注射針 (25或27-gauge x 5/8”)? (c) 限制裝置
不要使用腹腔注射（IP）(a) 或 靜脈注射 IV (b) 的方式注射小鼠
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