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Cayman檢測試劑盒(Assay kits)---細胞活性檢測概述篇

2021-05-08
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細胞活性(Cell?Viability)是細胞生物學(xué)實驗的一項重要檢測指標，是細胞培養(yǎng)、細胞毒性及生理研究的基礎(chǔ)。Cayman提供多種細胞活性檢測相關(guān)試劑盒，可用于評估細胞增殖、細胞活性、代謝活性、細胞周期、細胞毒性和凋亡等。

細胞增殖檢測，確定活躍分裂細胞的數(shù)量，最直接簡單的方法就是細胞計數(shù)。細胞活性(Cell?Viability)?被定義為樣品中健康活細胞的數(shù)量占總細胞的百分比，確定樣本中活細胞及死細胞的數(shù)量。同時，檢測DNA含量或代謝活性也可提供更多相關(guān)信息。

質(zhì)膜完整性（Plasma?Membrance?Integrity）
評估細胞膜完整性是檢測細胞活性和評估細胞毒性最常用和最直接的方法之一。具有細胞毒性效應(yīng)的化合物通常會破壞細胞膜的完整性，誘導(dǎo)細胞壞死。如碘化丙啶(Propidium?iodide,?PI)染料通常被會健康的細胞排除在外，然而當細胞膜有破損時，PI則可自由跨過細胞膜而對細胞核染色。用PI染料可同時區(qū)分健康細胞和死細胞。同樣，Cayman提供的7-AAD細胞活力檢測試劑盒，7-AAD不能進入活細胞但可透過死細胞或受損細胞膜，而標記胞內(nèi)DNA。

或者，細胞膜完整性也可通過監(jiān)測胞內(nèi)物質(zhì)釋放到胞外基質(zhì)來評估。一個最常用的檢測指標就是乳酸脫氫酶LDH分子，其為一種可溶性的胞漿酶。當胞膜損傷時，LDH可快速釋放到細胞培養(yǎng)液中。Cayman提供的LDH細胞毒性檢測試劑盒即可用于檢測細胞壞死膜受損時，LDH的釋放。

健康完整的細胞可經(jīng)過固定、去垢劑破膜處理，通過上述類似的標記方法來研究細胞周期進程。Cayman提供的細胞周期時相鑒定試劑盒利用碘化丙啶/PI，來標記細胞周期不同時相的DNA。由于PI可直接嵌入DNA鏈的堿基對，因此其熒光強度與細胞中DNA含量成正比。根據(jù)染色體的分布，能可靠顯示G0/G1?Vs?S?Vs?G2/M期。此外，CFSE細胞分裂檢測試劑盒采用一種熒光染料，可擴散通過活細胞的質(zhì)膜。CFSE在細胞分裂增殖過程中，其熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據(jù)這一特性，CFSE可用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等。7-AAD/CFSE細胞介導(dǎo)的細胞毒性檢測試劑盒，可用于鑒定增殖分裂的細胞，同時標記受損或死細胞的DNA。最后，Cayman提供的細胞自噬/細胞毒性雙染色試劑盒利用自發(fā)熒光探針單丹磺酰尸胺（Monodansylcadaverine?MDC)?以及碘化丙啶PI可同時檢測吞噬泡和死細胞。

Cayman檢測試劑盒(Assay kits)---細胞活性檢測概述篇




圖1.?細胞凋亡、自噬及壞死途徑

線粒體活性與凋亡（Mitochondrial?Activity?and?Apoptosis）?

線粒體最主要的作用是產(chǎn)生ATP，細胞能量的主要來源。此外，線粒體其他的作用還包括參與細胞信號傳導(dǎo)、細胞分化、細胞死亡以及細胞周期調(diào)控和細胞生長等。檢測線粒體的活性也可顯示細胞的健康狀態(tài)。Cayman最近研發(fā)的一系列試劑盒(Mitocheck?Activity?Assay?kits)用于檢測電子傳遞鏈復(fù)合物I,?II,?III的活性(詳情請閱讀后續(xù)相關(guān)章節(jié))。線粒體也可通過干擾電子傳遞、氧化磷酸化和ATP生成，或通過釋放能活化caspase家族蛋白酶的蛋白，或改變胞內(nèi)氧化還原電勢等來誘導(dǎo)細胞凋亡。JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位的理想熒光探針。Cayman提供的JC-1?Mitochondiral?Membrance?Potential?Assy能可靠檢測細胞凋亡早期階段的線粒體膜電位變化。Caspase-3?Fluorescence?Assay通過鑒定特異性凋亡標志分子caspase-3的活化，來檢測線粒體誘發(fā)的凋亡。

此外，Cayman還提供多種試劑盒用于檢測凋亡過程中不同時間點的形態(tài)變化。Annexin?V-FITC試劑盒用于檢測凋亡早期膜的不對稱性變化。磷脂不對稱性的分布于細胞質(zhì)膜，其中磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,?PS)?主要分布于質(zhì)膜內(nèi)層。在細胞凋亡的早期，雖然細胞膜仍保持完整性，但磷脂分布的不對稱性受干擾，磷脂酰絲氨酸外翻，暴露于細胞膜外層。在Ca2+存在時，Annexin?V可與帶負電荷的磷脂如PS結(jié)合。在細胞凋亡的晚期階段，可使用Cayman的?Apoptotic?Bleds?Assay試劑盒進行檢測，該試劑盒利用重組的抗體，與凋亡細胞膜泡上的自身抗原結(jié)合。Multi?Parameter?Apoptosis?Assay?kit聯(lián)合使用4種不同的試劑，同時檢測多種凋亡事件。該獨特的試劑盒利用FITC-Annexin?V結(jié)合物作為探針檢測質(zhì)膜不對稱性，用TMRE作為探針檢測線粒體膜電位，用7-AAD作為膜通透性/細胞活力指示劑，再用Hoechst染料展示細胞核形態(tài)。

代謝活性（Metabolic?Activity）?
細胞計數(shù)反映絕對細胞數(shù)的多少，而代謝活性更多是對細胞健康狀態(tài)的評估。將二者結(jié)合起來，便可更全面具體的了解細胞的活性。例如，在抗腫瘤藥物研發(fā)中，其目的可能不需致死細胞而僅需敲除其代謝和增值活性，使細胞維持在預(yù)期的靜止狀態(tài)。

檢測代謝活性的一個經(jīng)典方法是利用四唑鹽(Tetrazolium?salts)，其在代謝活躍的細胞線粒體中，被切割形成有色的不溶于水的MTT，或水溶性的XTT,?WST-1和WST-8甲臢(formazan),?然后再測定吸光度。產(chǎn)生的甲瓚染料的量與代謝活躍的細胞數(shù)量直接相關(guān)，可顯示細胞的還原電位。MTT法是細胞增殖檢測最常規(guī)的方法，久享盛譽，具有大量的文獻支持。但是，與一些新的四唑鹽法相比，MTT法靈敏度較低。另一個缺點就是由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需有機溶劑DMSO溶解后才能在分光光度計上讀數(shù)，增加了實驗操作步驟。而XTT,?WST-1和WST-8則產(chǎn)生水溶性的甲瓚產(chǎn)物，省去了后續(xù)的溶解步驟。尤其，WST-8與其它四唑鹽相比，更穩(wěn)定、細胞毒性更低，適用于較長時間孵育，而且WST-8檢測靈敏度比其他四唑鹽更高。Cayman提供的Pertecta3D??Cell?Viability?Kit適用于3D細胞培養(yǎng)，是基于酶催化還原WST-1生成一種甲臢衍生物來進行檢測的。與傳統(tǒng)的放射性[3H]標記的胸腺嘧啶脫氧核苷或非放射性的5-溴-2'-脫氧尿苷(Brdu)方法相比，MTT,XTT,?WST-1和WST-8具有操作簡便的優(yōu)點。

Cayman檢測試劑盒(Assay kits)---細胞活性檢測概述篇



圖2.?NADPH氧化酶產(chǎn)生的活性氧


面對如此眾多的細胞活性檢測試劑盒，哪一款最適合您的研究呢？?

?哪一款最適合您的研究呢？? 細胞增殖 細胞活性 細胞毒性 細胞凋亡 細胞自噬
?細胞周期時相檢測試劑盒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?Cell?Cycle?Phase?Determination?Kit ● ●


?7-AAD細胞活性檢測試劑盒?????????????????????????
?7-AAD?Cell?Viability?Assay?kit
● ●

?CFSE?細胞分裂檢測試劑盒?????????????????????????????
?CFSE?Cell?Division?Assay?Kit 		●



?7-AAD/CFSE?細胞介導(dǎo)的細胞毒性檢測試劑盒?
?7-AAD/CFSE?Cell-Mediated?Cytotoxicity?Assay?Kit 		● ● ●

?LDH?細胞毒性檢測試劑盒?????????????????????????????????
?LDH?Cytotoxicity?Assay?Kit
● ●

?自噬/細胞毒性雙染試劑盒???????????????
?Autophagy/Cytotoxicity?Dual?Staining?Kit
● ●
●
?JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒????????????????????????????
?Mitochondrial?Membrane?Potential?Assay?Kit


●
?Caspase-3熒光檢測試劑盒???????????????????????????????
?Caspase-3?Fluorescence?Assay?Kit


●
?Annexin?V?FITC?凋亡檢測試劑盒???????????
?Annexin?V?FITC?Assy?Kit


●
?凋亡空泡檢測試劑盒????????????????????????????????????????????
?Apoptotic?Blebs?Assay


●
?多參數(shù)凋亡檢測試劑盒????????????????????????????????????????
?Multi-Parameter?Apoptosis?Assay?Kit
● ● ●
?MTT?細胞增殖檢測試劑盒???????????????????????????????????
?MTT?Cell?Proliferation?Assay?Kit 		● ● ●

?XTT?細胞增殖檢測試劑盒?????????????????????????????????
?XTT?Cell?Proliferation?Assay?Kit 		● ● ●

?WST-1?細胞增殖檢測試劑盒???????????????????????????????
?WST-1?Cell?Proliferation?Assay?kit 		● ● ●

?WST-8?細胞增殖檢測試劑盒??????????????????????????????
?WST-8?Cell?Proliferation?Assay?kit 		● ● ●

?3D培養(yǎng)細胞活性檢測試劑盒?????????????????????????????
?Perfecta?3D??Cell?Viability?Kit 		● ● ●

(原文By:?Olivia?L.May,?Ph.D.?編譯：欣博盛市場部Harry)
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