帕金森病屬于神經(jīng)衰退類疾病，對老年人生活質(zhì)量的影響不容忽視。由于神經(jīng)衰退疾病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及到的一些錯誤折疊蛋白無法被深入研究，導(dǎo)致目前帕金森病病因仍不明確，尚沒有根治辦法。

?

在錯誤折疊蛋白中，一個不能忽視的蛋白就是?α?突觸核蛋白。近些年來有關(guān)該蛋白的研究不在少數(shù)，但是由于α突觸核蛋白的多樣性和復(fù)雜性，科研學(xué)者們很難確定到底是蛋白折疊的哪個環(huán)節(jié)出現(xiàn)了問題。

α突觸核蛋白總的來說分為可溶性單體、寡聚體以及不溶性原纖維，目前的共識是寡聚體是所有?α?突觸核蛋白類型中毒性最高的，而且可能是導(dǎo)致蛋白聚集和病理現(xiàn)象擴(kuò)散的關(guān)鍵。

?

但是由于α突觸核蛋白寡聚體大小各異，處于動態(tài)平衡狀態(tài)，很容易聚集形成聚集體或分離成單體，所以目前很難分離出高純度的寡聚體。雖然目前全球有一些實(shí)驗(yàn)室分離出了少量的α突觸核蛋白寡聚體，但是卻沒有達(dá)到可以量產(chǎn)并能夠提供給其他學(xué)者來分析其結(jié)構(gòu)功能的程度。

?

StressMarq 今年全新推出動態(tài)學(xué)穩(wěn)定（kinetically stable/trapped）的?α?突觸核蛋白寡聚體（SPR-484），該α突觸核蛋白寡聚體不含任何誘導(dǎo)劑或抑制劑，可用于活性電泳（native PAGE）、體內(nèi)體外檢測以及疾病建模。由于不含任何誘導(dǎo)劑或抑制劑（多巴胺、茶多酚 EGCG 等），科研學(xué)者們可以更直接地研究其結(jié)構(gòu)及其在細(xì)胞和活體中的反應(yīng)，不需要擔(dān)心其他成分的影響。

?

● StressMarq 實(shí)驗(yàn)室 SPR-484 的產(chǎn)品數(shù)據(jù)，見圖1～圖4

?

圖 1.?動態(tài)學(xué)穩(wěn)定的 α?突觸核蛋白寡聚體（SPR-484）和 α 突觸核蛋白原纖維（SPR-322）電鏡圖

注：A 為 SPR-484 電鏡圖；B 為 SPR-322 電鏡圖。負(fù)染色透射電子顯微鏡圖像在 80 Kv 下使用磷鎢酸和醋酸鈾染色，在碳涂層的 400 目銅網(wǎng)格上獲得。

?

?由圖1? ?可以清晰地看到， SPR-484 α突觸核蛋白寡聚體呈現(xiàn)圓球 / 短圓柱形狀，并且具有很高的均勻性，而?α?突觸核蛋白原纖維（SPR-322）則為長條纖維狀。SPR-484 α突觸核蛋白寡聚體沒有使用任何誘導(dǎo)劑或抑制劑來鎖定寡聚體狀態(tài)，并且寡聚體含量能達(dá)到 90%。

圖 2. SPR-484?的活性電泳和尺寸排阻色譜（SEC）?

注：A 為凍融一次后的動態(tài)學(xué)穩(wěn)定寡聚體的活性電泳。

60 kDa 處出現(xiàn)條帶是因?yàn)?SPR-484 中含有少量單體，α?突觸核蛋白單體是一個內(nèi)在無序的 14 kDa 的蛋白，由于它在溶液中的伸展結(jié)構(gòu)，游離的?α?突觸核蛋白單體在活性電泳和 SEC 中的遷移和球狀的 60 kDa 寡聚體類似。而大于 250 kDa 的條帶是動態(tài)學(xué)穩(wěn)定的?α?突觸核蛋白寡聚體。B 和 C 分別是凍融一次后和 37℃?孵育兩周后的 SPR-484 尺寸排阻色譜（SEC）。

?

?由圖2? 可以看出，即使是在凍融和 37℃?處理 14 天后，在峰值區(qū)域大概仍有 90%?的 SPR-484α突觸核蛋白寡聚體穩(wěn)定于寡聚體狀態(tài)。

?

圖 3. SPR-484?對多巴胺能神經(jīng)元毒性檢測

注：A為經(jīng)寡聚體處理后 11 天，大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元的存活率由抗 MAP2 抗體量化（對照組設(shè)定為 100%）；B 為經(jīng)寡聚體處理后 11 天，大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元中存在的 α 突觸核蛋白 pSer129 水平可通過抗 α-突觸核蛋白 pSer129 抗體與抗 MAP2 抗體的比率量化（對照組設(shè)定為 100%）。

?

?由圖3??可以看出，SPR-484 α突觸核蛋白寡聚體對多巴胺能神經(jīng)元有毒性并且可以誘發(fā)帕金森病理現(xiàn)象（pSer129）。所有數(shù)據(jù)經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)驗(yàn)證，而非偶然性結(jié)果。

?

圖 4. SPR-484?處理的大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元（IHC）

注：A 為用對照 PBS 緩沖液處理后 11 天的大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元，B 為用 10 μg/mL SPR-484 處理后 11 天的大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元。

細(xì)胞核染色藍(lán)色（Hoechst），多巴胺能神經(jīng)元顯示紅色（MAP2），病理現(xiàn)象為綠色（α-syn pSer129）。兩個培養(yǎng)基都使用雞抗-MAP-2 多克隆抗體，小鼠抗-αsyn pSer129-特異的單克隆抗體，Alexa Fluor 488 羊抗小鼠 IgG，Alexa Fluor 647 羊抗雞 IgG，和熒光標(biāo)記物 Hoechst 溶于相同的溶液。白色箭頭指的是 pSer129 病理現(xiàn)象較強(qiáng)的區(qū)域，比例尺代表 100 μm。

注：SPR-484 為 E.coli 表達(dá)的，并且蛋白在加入神經(jīng)元之前沒有磷酸化。

?

?由圖4? 可以看出，動態(tài)學(xué)穩(wěn)定的SPR-484α突觸核蛋白寡聚體和原纖維一樣可以誘發(fā)病理現(xiàn)象。

?

StressMarq 年底特惠，包含 SPR-484 在內(nèi)的神經(jīng)衰退疾病相關(guān)抗體低至6?折，敬請聯(lián)系欣博盛生物相關(guān)區(qū)域業(yè)務(wù)員。

詳情請咨詢StressMarq全國授權(quán)一級代理-欣博盛生物科技?

全國服務(wù)熱線: 4006-800-892 ? ? ??郵箱: market@neobioscience.com?

深圳: 0755-26755892 ? ? ? ??北京: 010-88594029 ? ? ? ??上海: 021-34613729???????????

廣州:?020-87615159? ? ? ? ? ?香港: 852-69410778?

代理品牌網(wǎng)站: www.yuebanme.com

自主品牌網(wǎng)站: www.neobioscience.net