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多克隆抗體和單克隆抗體的區(qū)別詳解

2022-11-29
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多克隆抗體和單克隆抗體的區(qū)別:

多克隆抗體
單克隆抗體
?與抗原上不同表位結合的多種不同抗體?只識別抗原上一種表位的單一抗體
?非表位特異的?表位特異的
?與相似抗原有更高的交叉反應低交叉反應
可能有較高背景干擾低背景干擾
?各批次有所不同每批次完全一致
?成本較低成本較高
?制備耗時短 (約3個月)制備耗時長 (約6個月)
多種宿主物種可選宿主物種選擇不多


什么是單克隆抗體?

Monoclonal-Antibodies-Icon/單克隆抗體定義:

單克隆抗體是僅與目標抗原某一特定表位結合的單一抗體


單克隆抗體的制備

單克隆抗體制備時首先要將免疫原注射到宿主動物體內,當免疫原誘發(fā)宿主產生免疫反應,脾臟就會產生大量不同種類的B-細胞。此時單一的B-細胞被提取出來,與骨髓瘤細胞雜交 (癌癥B-細胞)。


之所以要將B-細胞與骨髓瘤細胞雜交,是因為健康正常的脾細胞無法在細胞培養(yǎng)基無限存活,而與骨髓瘤細胞雜交形成雜交瘤細胞后,該細胞就成為永生化胞株,不斷產生抗體。


單一B-細胞從脾臟中分離,形成雜交瘤細胞后,產生的抗體就是單一抗體,只與目標抗原上某一特定的表位反應。


每一個雜交瘤生產出單一的單克隆抗體,這個雜交瘤就被賦予一個克隆號,以此來方便辨別這個特異的抗體是識別哪一個特定的表位。


B-細胞將單克隆抗體分泌至細胞培養(yǎng)基中,然后提取出來做后續(xù)的檢測和純化。


一旦單克隆抗體雜交瘤克隆生成,該克隆就十分穩(wěn)定,可以重復使用,這就確保了每一批次的抗體是完全一致的。


雜交瘤也可以被注射到小鼠的腹腔中大量生產,雜交瘤分泌富含抗體的一種液體,被稱作腹水,用注射器抽取,就可獲得大量的單克隆抗體。


單克隆抗體適用于:

檢測單一抗原

檢測蛋白質家族的單一成員

不同實驗/批次的結果穩(wěn)定一致

細胞染色背景較低-很適用于IHC、ICC、IF等應用

量化蛋白質表達(例:流式或熒光細胞分選)

探測分子結構變化

探測磷酸化狀態(tài)變化

為X射線晶體學探測目標

免疫治療


單克隆抗體不建議用于:

根據同源性檢測不同物種的目標蛋白

檢測濃度較低的目標蛋白

檢測形態(tài)變化了的蛋白


什么是多克隆抗體?

Polyclonal-Antibodies-Icon/多克隆抗體定義

多克隆抗體是與目標蛋白上多種不同表位結合的多種不同抗體。


多克隆抗體制備

多克隆抗體的第一步和單克隆抗體一樣,都是將免疫原注射到宿主體內產生免疫反應,激活了多種B細胞。不同的是免疫過后,多克隆抗體就直接從免疫宿主的血清中分離出來,或純化,沒有與骨髓瘤細胞融合的過程。一旦宿主動物死亡,需要免疫新的動物,這時血清中的抗體就會有所不同。


根據制備方法的不同,功能自然也就有所不同了。雖然多抗每批次有輕微差別,但是因為它識別的表位多,這個差別影響并不算太大,而單克隆抗體雖然價格偏高,可是特異性更強更穩(wěn)定。


多克隆抗體適用于:

檢測有高同源性的抗原的已知或未知同種型

檢測濃度較低的抗原

捕獲盡可能多的抗原(例:IP或ChIP)

檢測變性的蛋白

檢測可能發(fā)生了糖基化或形態(tài)變化的目標蛋白

用多種檢測方法檢測一種原蛋白時

檢測pH和鹽度不同的溶液中的目標蛋白


多克隆抗體不建議用于:

量化檢測,例:流式。由于不同表位的結合導致信號被放大加強,可能會導致結果不準確

當高同源性蛋白的交叉反應會引起問題時


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