?FuGENE??4K——四步輕松搞定轉(zhuǎn)染
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細胞轉(zhuǎn)染,是將外源基因?qū)胝婧思毎?,是用來研究基因表達調(diào)控的有效手段。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類:一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(永久轉(zhuǎn)染)。目前,常用的目的基因?qū)敕椒ㄓ辛姿徕}沉淀法、電穿孔法、病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及顯微注射法等。理想細胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。
幾種常見的轉(zhuǎn)染方法對比:
轉(zhuǎn)染方法 | 原理 | 特點 | 應(yīng)用 |
磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞。 | 不適用于原代細胞,操作簡便但重復(fù)性差,有些細胞不適用。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn) |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入。 | 適用性廣,但細胞致死率高,DNA和細胞用量大。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn),所有細胞 |
病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 | 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 有安全風(fēng)險;限定宿主細胞。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),特定宿主細胞 |
陽離子脂質(zhì)體法 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞。 | 適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時需除去血清。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn),所有細胞 |
陽離子聚合物法 | 帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進入細胞。 | 除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高,操作簡單,適用范圍廣,重復(fù)性好等特點外,還具有在體內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,細胞毒性低等特點,是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn),所有細胞 |
顯微注射法 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核。 | 轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn) |
FuGENE??4K是FuGENE最新研發(fā)的最有效的廣譜DNA轉(zhuǎn)染試劑,它轉(zhuǎn)染效率高、毒性低、可重復(fù)性好,無論是原代細胞、干細胞等難轉(zhuǎn)染細胞系,還是293和CHO等懸浮細胞,FuGENE?4K都展現(xiàn)出非凡的轉(zhuǎn)染性能。FuGENE??4K是FuGENE??HD試劑的升級版,產(chǎn)品性能優(yōu)于Lipofectamine?3000。僅需1瓶試劑,4步就可輕松搞定轉(zhuǎn)染實驗,無需添加額外試劑,轉(zhuǎn)染步驟簡單快速!
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STEP 1?轉(zhuǎn)染當(dāng)天培養(yǎng)細胞至70%-90%的融合度
STEP 2 準(zhǔn)備DNA質(zhì)粒
將2μg質(zhì)粒DNA(0.2-1μg/μl)添加到預(yù)熱的培養(yǎng)基中并渦旋。
STEP 3?加入FuGENE?4K
按FuGENE?4K轉(zhuǎn)染試劑:DNA=3:1的比例,將6μl FuGENE?4K試劑直接加入培養(yǎng)基中,立即混合。其他比例,請參考產(chǎn)品說明書。將FuGENE?4K/DNA混合物在室溫下孵育5-15min。
STEP 4?轉(zhuǎn)染及分析
將FuGENE?4K /DNA混合物加入細胞中,培養(yǎng)24-48小時。分析轉(zhuǎn)染效率。
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產(chǎn)品信息
名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
FuGENE??4K DNA?Transfection Reagent | 4K-1000 | 1mL |
4K-5000 | 5mL (5 x 1ml) |
4K-10000 | 10mL |
4K-25000 | 25mL |
4K-50000 | 50mL |
4K-250000 | 250mL |
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