CUTANA? CUT&Tag Kit添新品啦!助您輕松應(yīng)對(duì)CUT&Tag實(shí)驗(yàn)
EpiCypher推出新品CUTANA? CUT&Tag Kit,為組蛋白翻譯后修飾(PTM)的超靈敏定位提供了全面的解決方案。CUTANA? CUT&Tag Kit使用專(zhuān)有的Direct-to-PCR策略,在一個(gè)管中即可完成從細(xì)胞到PCR文庫(kù)擴(kuò)增,無(wú)需傳統(tǒng)的文庫(kù)制備流程,最大限度地減少樣本損失。與多道移液器兼容,提高了通量和重復(fù)性。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTM) 通過(guò)功能基團(tuán)或蛋白質(zhì)的共價(jià)添加、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個(gè)蛋白質(zhì)的降解來(lái)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性。這些修飾包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制的所有方面。染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)作為用于研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的常用技術(shù),仍然具有相當(dāng)?shù)木窒扌浴=陙?lái),基因組學(xué)和表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域引入了兩種新穎的染色質(zhì)分析方法,即核酸酶靶向切割和釋放技術(shù)(CUT&RUN)與靶向剪切及轉(zhuǎn)座酶技術(shù)(CUT&Tag),克服了ChIP法的諸多缺點(diǎn),令研究人員能夠用更低的成本、更高的效率得到信噪比更高、重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
什么是CUT&Tag技術(shù)?
CUT&Tag全稱(chēng)Cleavage Under Targets and Tagmentation (CUT&Tag),是基于CUT&RUN的新興姊妹技術(shù)。在EpiCypher的CUT&Tag實(shí)驗(yàn)流程中,孵育結(jié)合好特異性抗體與靶標(biāo)蛋白后,加入蛋白 A、蛋白G與Tn5的復(fù)合物(pAG-Tn5),使得轉(zhuǎn)座體進(jìn)入細(xì)胞并與抗體結(jié)合,間接地固定在靶蛋白上;激活Tn5酶的切割活性,將靶蛋白結(jié)合的DNA區(qū)域切斷,從而達(dá)到提取DNA、進(jìn)行PCR擴(kuò)增、構(gòu)建文庫(kù)的目的。在Tn5上融合了protein A/G抗體結(jié)合功能域的轉(zhuǎn)座體pAG-Tn5是該技術(shù)的核心,使研究者不必碎裂染色質(zhì)并跳過(guò)了傳統(tǒng)的文庫(kù)準(zhǔn)備步驟(end repair, adapter ligation)。
CUT&Tag技術(shù)有何特色?
精簡(jiǎn)化的工作流程跳過(guò)了傳統(tǒng)ChIP-seq具有挑戰(zhàn)性的步驟,包括染色質(zhì)碎片和抗體下拉,用更少的細(xì)胞和測(cè)序讀段生成高分辨率數(shù)據(jù)。
◆ 更短的實(shí)驗(yàn)周期
在兩天內(nèi)能夠完成從細(xì)胞到文庫(kù)的建立,而傳統(tǒng)的ChIP-seq需要五天(或更長(zhǎng)時(shí)間)。
◆ 更少的細(xì)胞需求量與更低的成本
CUTANA?CUT&Tag分析僅使用10000-100000個(gè)細(xì)胞核即可生成高分辨率的圖譜,甚至可用于單細(xì)胞水平測(cè)序,便于單細(xì)胞或珍貴樣本的分析;與傳統(tǒng)ChIP-seq(需要約3000萬(wàn)次讀?。┫啾?,CUT&Tag檢測(cè)僅需要500-800萬(wàn)次測(cè)序讀段,節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
◆ 更高的信噪比
CUTANA?CUT&Tag使用較少的起始細(xì)胞、更少的測(cè)序讀段,也能得到較低的背景信號(hào)和較強(qiáng)的目的信號(hào)。
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◆ 無(wú)需文庫(kù)準(zhǔn)備步驟
測(cè)序文庫(kù)的準(zhǔn)備工作既費(fèi)時(shí)又昂貴。通過(guò)在抗體結(jié)合的目標(biāo)位點(diǎn)添加測(cè)序適配器,能夠?qū)崿F(xiàn)跳過(guò)傳統(tǒng)的文庫(kù)準(zhǔn)備步驟(end repair, adapter ligation),極大地簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程。EpiCypher的CUTANA?CUT&Tag分析通過(guò)直接從反應(yīng)混合物中擴(kuò)增標(biāo)記DNA進(jìn)一步簡(jiǎn)化了這一策略,實(shí)現(xiàn)在一個(gè)管中完成從細(xì)胞到PCR文庫(kù)擴(kuò)增。
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產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
14-1102? ? ? | CUTANA? CUT&Tag Kit , Primer Set 1? ? ?? | 48 reactions? ? ?? |
14-1103? ?? | CUTANA? CUT&Tag Kit , Primer Set 2? ?? | 48 reactions? ?? |
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CUTANA? CUT&Tag試劑盒:用戶友好的表觀基因組分析工具
試劑盒內(nèi)包括CUT&Tags實(shí)驗(yàn)所需所有組分與對(duì)照品:
? 對(duì)照抗體 (Control antibodies)
? spike-in對(duì)照 (Nucleosome spike-in controls)
? 詳細(xì)的質(zhì)控分析評(píng)價(jià)指標(biāo)?(Detailed quality control metrics)?
? 故障排除小貼士 (Troubleshooting tips)
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試劑盒組分(藍(lán)色的為EpiCypher特有的組分)
名稱(chēng) | 貨號(hào) |
pAG-Tn5 | 15-1017 |
H3K27me3 Positive Control Antibody | 13-0055t |
Rabbit IgG Negative Control Antibody | 13-0042t |
Anti-Rabbit Secondary Antibody | 13-0047 |
SNAP-CUTANA? K-MetStat Panel | 19-1002t |
ConA Beads | 21-1401 |
Non-Hot Start 2X PCR Master Mix | 15-1018 |
8-strip Tubes | 10-0009t |
4.5 M NaCl | 21-1013 |
0.5 M EDTA | 21-1014 |
1 M MgCl2 | 21-1015 |
TAPS Buffer | 21-1016 |
SDS Release Buffer | 21-1017 |
SDS Quench Buffer | 21-1018 |
0.1X TE Buffer | 21-1019 |
Pre-Wash Buffer | 21-1020 |
Pre-Nuclear Extraction Buffer | 21-1021 |
Bead Activation Buffer | 21-1022 |
5% Digitonin | 21-2023 |
1 M Spermidine | 21-1024 |
SPRIselect reagent manufactured by? Beckman Coulter, Inc | 21-1404 |
Multiplexing Primers | 14-1102 and 14-1103 each contain combinatorial dual? indices for multiplexed sequencing?of up to 48 reactions.? Combine the kits to multiplex up to 96 reactions. |
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CUTANA? CUT&Tag試劑盒特點(diǎn)
? 可對(duì)低數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行可靠的分析
? 從細(xì)胞到測(cè)序僅需2天
? 與ChIP相比檢測(cè)成本更低
? 獨(dú)有的單管流程,最大限度提高回收率并簡(jiǎn)化您的工作流程
EpiCypher是一家成立于2012年的表觀遺傳學(xué)公司。從專(zhuān)有組蛋白肽陣列平臺(tái)EpiGold?開(kāi)始,EpiCypher開(kāi)發(fā)了一系列同類(lèi)產(chǎn)品。同時(shí),EpiCypher是重組核小體制造和開(kāi)發(fā)的全球領(lǐng)導(dǎo)者。利用其獨(dú)有技術(shù),不斷添加高純度修飾重組核小體(dNucs?)產(chǎn)品。dNuc?多樣性的產(chǎn)品為破譯組蛋白編碼和加速藥物開(kāi)發(fā)提供了強(qiáng)大的工具。EpiCypher還將dNuc?技術(shù)廣泛的應(yīng)用于多種分析測(cè)定產(chǎn)品中,包括:SNAP-ChIP?Spike-in Controls(用于抗體分析和ChIP定量), EpiDyne?底物(用于染色質(zhì)重塑和抑制劑篩選及開(kāi)發(fā)),dCyher?測(cè)定(用于探究表觀遺傳蛋白質(zhì)-組蛋白PTM結(jié)合相互作用)。最近,EpiCypher還推出了針對(duì)ChIC、CUT&RUN和CUT&Tag的高靈敏度表觀基因組圖譜CUTANA?分析。
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