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Mirus公司新推出轉(zhuǎn)染試劑TransIT-VirusGEN^? Transfection Reagent，該產(chǎn)品旨在增強(qiáng)載體轉(zhuǎn)染到

貼壁或懸浮的HEK 293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，并增加重組腺相關(guān)病毒或慢病毒的產(chǎn)量。

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使用TransIT-VirusGEN^?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染懸浮或貼壁HEK293細(xì)胞可獲得最高的轉(zhuǎn)染效率。使用不同的轉(zhuǎn)

染試劑將pAAV-hrGFP，pAAV-RC和pAAV-Helper（按照1:1:1比率，1.5μg，Agilent）轉(zhuǎn)染到懸浮

Ffeestyle –F細(xì)胞（培養(yǎng)于FreeStyleTM F17培養(yǎng)基, A）和貼壁的293T / 17細(xì)胞（B）中：TransIT-Vir

usGEN（2:1,?vol:wt），Lipofectamine 2000（3:1），Lipofectamine 3000（3:3:1）和25kDa PEI

（4:1）。收獲的病毒用于轉(zhuǎn)導(dǎo)HT1080細(xì)胞，轉(zhuǎn)導(dǎo)后48h后，使用guava easyCyte TM 5HT流式細(xì)胞

儀檢測(cè)GFP的表達(dá)。功能性滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)算。

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使用TransIT-VirusGEN^?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染懸浮或貼壁HEK293細(xì)胞可獲得最高的轉(zhuǎn)染效率。使用不同的轉(zhuǎn)

染試劑將pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP TM載體和Lentivirus慢病毒混合物（1:1）轉(zhuǎn)染到懸浮Ffeest

yle –F細(xì)胞（培養(yǎng)于FreeStyleTM F17培養(yǎng)基, A）和貼壁的293T / 17細(xì)胞（B）中： TransIT-VirusGE

N? (3:1, vol:wt), Lipofectamine? 2000 (2:1 (A)或 3:1 (B)), Lipofectamine? 3000 (2:2:1 (A) 或3:3:1

?(B)) 和 25 kDa PEI (4:1)。收集上清液，過(guò)濾（0.45μm），使用293T / 17細(xì)胞滴定。 使用8μg/ ml Tr

ansduceIT TM進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)72h后使用guava easyCyte? 5HT流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP表達(dá)情況。

功能性滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)算。

TransIT-VirusGEN^?轉(zhuǎn)染試劑的強(qiáng)擴(kuò)展性。使用TransIT-VirusGEN?轉(zhuǎn)染試劑（2:1 (vol:wt), Mirus）

將pAAV-hrGFP，pAAV-RC和pAAV-Helper（按照1:1:1比率，1.5μg/ml，Agilent）轉(zhuǎn)染到懸浮Ffee

style –F細(xì)胞（培養(yǎng)于FreeStyleTM F17培養(yǎng)基, A）和貼壁的293T / 17細(xì)胞（B）中。收獲的病毒用于

轉(zhuǎn)導(dǎo)HT1080細(xì)胞，轉(zhuǎn)導(dǎo)后48h后，使用guava easyCyte TM 5HT流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP的表達(dá)。功能性

滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)算。

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