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當(dāng)細(xì)胞隨時間或刺激而改變時，PrimeFlowTM?RNA?Assay?可揭示單個細(xì)胞內(nèi)RNA和蛋白表達(dá)的動力學(xué)關(guān)系，實(shí)現(xiàn)了前所未有的相關(guān)性分析。這種新穎的分析僅需標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀，利用熒光原位雜交（FISH）實(shí)現(xiàn)了單個細(xì)胞內(nèi)多達(dá)三種RNA轉(zhuǎn)錄本的同時檢測。PrimeFlow?RNA?Assay?兼容傳統(tǒng)熒光染料對細(xì)胞表面及胞內(nèi)抗體進(jìn)行染色。此技術(shù)是基于成熟且有大量文獻(xiàn)支持的ViewRNA分析技術(shù)，它利用顯微鏡分析細(xì)胞和組織中RNA表達(dá)位置，結(jié)合成對寡核苷酸探針以及分支DNA（bDNA）信號放大，實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平檢測基因表達(dá)。

在流式細(xì)胞儀上同時檢測蛋白和RNA，能獲得不同細(xì)胞群的多參數(shù)數(shù)據(jù)，并在單細(xì)胞水平上提供深入而高內(nèi)涵的細(xì)節(jié)。相比之下，芯片和測序只能提供細(xì)胞群體基因表達(dá)的平均水平；然而平均化的結(jié)果往往會掩蓋獨(dú)特細(xì)胞亞群的個體影響。利用PrimeFlow?RNA?Assay，我們可分析特定細(xì)胞群的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平，或在一段時間內(nèi)評估細(xì)胞亞群，以便同時測定轉(zhuǎn)錄調(diào)控和蛋白表達(dá)。獨(dú)特的視角可以回答過去無法回答的問題，并推動生物學(xué)多個領(lǐng)域的研究有廣泛的影響。

觀察幾百萬個單細(xì)胞中基因表達(dá)的不均一性。

關(guān)聯(lián)同一細(xì)胞中的RNA和蛋白表達(dá)

檢測細(xì)胞亞群中的非編碼RNA

評估感染細(xì)胞中病毒RNA的表達(dá)

在沒有蛋白相應(yīng)抗體時，分析mRNA表達(dá)水平

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PrimeFlowTM?RNA?Assay?的技術(shù)

????? 熒光原位雜交（FISH）是一種強(qiáng)大的創(chuàng)新技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了固定細(xì)胞中核糖核酸目標(biāo)的特異性定位。應(yīng)用的基本前提依賴于通過核酸探針的依次雜交，從而提供了單細(xì)胞水平的基因表達(dá)信息。由于非特異性結(jié)合及低效的信號放大，傳統(tǒng)的FISH技術(shù)往往受到背景值高和靈敏度低的限制而無法廣泛應(yīng)用。

?????? PrimeFlow?RNA?Assay融合了專利的探針組設(shè)計(jì)和bDNA信號放大技術(shù)，通過流式細(xì)胞儀來分析RNA轉(zhuǎn)錄本。bDNA技術(shù)通過放大信號而不是擴(kuò)增目標(biāo)序列，為RNA檢測提供了一種獨(dú)特的方法，能解決PCR分析數(shù)據(jù)重復(fù)性不高的問題，提供一致性的結(jié)果。

發(fā) 表 文?獻(xiàn)

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