根據(jù)下列的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）故障排除指南來快速找出問題原因，改善您的實驗步驟和解決方案。
首先從下面幾個情況中找到您的ELISA的問題所在:?
-標(biāo)準(zhǔn)曲線有問題?
變異系數(shù) (CV)高
高背景
樣品讀數(shù)過高
樣品讀數(shù)過低
注意: 如果使用的是StressXpress? ELISA 檢測試劑盒，請參照 StressXpress? ELISA 的故障排除指南。如果使用的是自己制作的ELISA試劑盒，請參考其他的ELISA試劑盒故障排除指南。
標(biāo)準(zhǔn)曲線有問題
標(biāo)準(zhǔn)品制備不當(dāng):
StressXpress? – 確保正確計算和實施了標(biāo)準(zhǔn)品稀釋度
StressXpress? – 在打開標(biāo)準(zhǔn)品之前要離心
如果標(biāo)準(zhǔn)品是凍干粉，在稀釋之前確保所有的成分都已經(jīng)溶解
使用精準(zhǔn)的移液器，并確保操作正確
標(biāo)準(zhǔn)品降解了:
StressXpress? – 確保標(biāo)準(zhǔn)品按照指示保存，以避免降解發(fā)生
使用新鮮的標(biāo)準(zhǔn)品
標(biāo)準(zhǔn)曲線不擬合:
使用不同的標(biāo)度或者曲線擬合
移液錯誤:
確保多道移液器是校準(zhǔn)好的
-變異系數(shù) (CV)高
酶標(biāo)板孔底部攪亂:
移液時避免接觸孔板底部。將移液器吸頭對準(zhǔn)孔壁，避免攪亂孔底區(qū)域。
孔中加試劑量不對:
StressXpress? – 根據(jù)說明書上的要求對每個孔加一定量的試劑
如果使用自動清洗系統(tǒng)，確保每個端口干凈無阻礙。
邊緣效應(yīng):
確保整個孔板溫度一致，并且試劑都是室溫。
移液錯誤:
保證多道移液器是校準(zhǔn)好的
清洗錯誤:
確保每次洗板前徹底移除所有孔中的緩沖液
樣品不均一:
使用前將樣品和試劑充分混合確保均一性
如果必要，將溶液中顆粒離心出來
振蕩混合不充分:
確保在所有的孵育步驟時將酶標(biāo)板放到振蕩器上
孔間污染:
避免使移液器吸頭與孔壁或孔中的試劑接觸
如果每次孵育使用同一個封板膜，確保試劑沒有沾染到封板膜上
-高背景
洗滌不充分:
StressXpress? – 按照說明書上指示的正確洗滌劑量和次數(shù)洗滌
在加底物溶液之前增加洗滌劑量和洗滌次數(shù)
樣品蒸發(fā)了:
用試劑盒中提供的封板膜或parafilm將酶標(biāo)板緊密覆蓋
空白對照有誤:
StressXpress? – 按照說明書要求正確混合空白對照的試劑
確保其他孔的讀數(shù)都減去了空白對照的讀數(shù)
反應(yīng)沒有終止:
StressXpress? – 確保每孔加入了正確劑量的終止液
使用新鮮的終止液
TMB 曝光失效:
使用前將TMB保存于遮光小瓶中
TMB 污染了:
在將TMB加入各孔前確保 TMB 清澈透明
空白孔受污染:
避免使多道移液器吸頭觸碰到板孔或孔中的試劑
酶標(biāo)板底部不潔:
徹底清洗酶標(biāo)板底部
-樣品讀數(shù)過高
樣品濃度太高:
StressXpress? – 按照實驗步驟里指示的稀釋樣品或根據(jù)特殊樣品優(yōu)化稀釋步驟
增加樣品稀釋度
HRP 濃度錯誤:
StressXpress? – 確保按照實驗步驟里指示的稀釋度使用HRP
孵育時間太長:
StressXpress? – 按照實驗步驟中指示的孵育樣品
減少孵育時間
-樣品讀數(shù)過低
抗原水平過低:
StressXpress? – 按照實驗步驟里指示的稀釋樣品或根據(jù)特殊樣品類型優(yōu)化稀釋步驟
降低樣品的稀釋度或者濃縮樣品
反應(yīng)時間太短:
StressXpress? – 根據(jù)實驗步驟決定最佳反應(yīng)時間
適量增加反應(yīng)時間
孵育時間太短:
StressXpress? – 根據(jù)是實驗步驟里描述的孵育樣品
增加孵育時間
孵育溫度過低:
StressXpress? – 按照實驗步驟中指示的溫度孵育樣品
優(yōu)化孵育溫度
酶標(biāo)板過期:
StressXpress? – 查看試劑盒包裝上的保質(zhì)期
包被新的酶標(biāo)板
抗體濃度過低:
StressXpress? – 使用實驗步驟里指示的抗體濃度
增加抗體濃度
底物不在室溫:
所有試劑使用前都必須保持室溫 (25?C)
波長不對:
確保酶標(biāo)板讀數(shù)時使用的合適的波長
酶標(biāo)板讀數(shù)延遲:
加入終止液后應(yīng)立即讀數(shù)，不要延遲
樣品類型不適用:
StressXpress? – 確保使用的物種和樣品類型是經(jīng)驗證過適用于該試劑盒的
洗滌過度:
StressXpress? – 根據(jù)實驗步驟使用合適的洗滌量和次數(shù)
將洗滌液輕緩移至板孔中
如果使用的是洗滌系統(tǒng)，確保壓力合適
板孔干透:
實驗操作時不要讓板孔干透
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