產(chǎn)品名稱：Annexin V-FITC/PI apoptosis assay kit

中文名稱：凋亡檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：20 / 50 / 100 Tests

產(chǎn)品貨號(hào)：FAK011.100/FAK012.20/FAK015.50

實(shí)驗(yàn)原理：

在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V進(jìn)行FITC標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶（Propidium Iodide , PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。

試劑盒組份

1. 濃縮結(jié)合緩沖液 4x (Binding Buffer 4x)

體積：3ml / 8ml / 15ml（4 倍濃縮液）

稀釋后溶液中各組分濃度：10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2 2. 碘化丙錠溶液 （Propidium Iodide）（避光保存及使用）

體積：210ul / 500ul / 1ml

濃度：20ug/ml

3. 重組人 Annexin V-FITC（避光保存及使用）

來(lái)源：大腸桿菌（E.coli）

分子量：35.8 KDa

體積：100ul / 250ul / 500ul，可用于 20 / 50 / 100 次實(shí)驗(yàn)

保存方法：于 50mM TRIS, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3, pH7.4 溶液中保存

純度：SDS-PAGE 和反相 HPLC 檢測(cè)表明其純度大于 98%

實(shí)驗(yàn)染色方法

標(biāo)記的 Annexin V 可用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞外膜上的磷酯酰絲氨酸，實(shí)驗(yàn)操作流程如下：

1. 用去離子水將濃縮結(jié)合緩沖液稀釋至 1x，可根據(jù)實(shí)際需要量稀釋；

2. 用 PBS 輕輕洗滌細(xì)胞兩次；

3. 用 200ul 結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞并使其濃度為 2-5×10^5/ml；

4. 取 195ul 的細(xì)胞懸液加入 5ul Annexin V-FITC，輕輕混勻后室溫避光孵育 10 分鐘；

5. 用 200ul 結(jié)合緩沖液洗滌細(xì)胞，再用 190ul 結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，加入 10ul 濃度為

20ug/ml 的碘化丙錠溶液；輕輕混勻后上流式細(xì)胞儀（FACS）進(jìn)行檢測(cè)分析。

注意事項(xiàng)

1. 細(xì)胞標(biāo)記染色后請(qǐng)盡快上機(jī)檢測(cè)，不宜長(zhǎng)時(shí)間放置。

2. PI 有毒，操作時(shí)請(qǐng)戴手套，注意防護(hù)。

3. 本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷或其他治療用途。

建議：

對(duì)于初次檢測(cè)的試驗(yàn)者為了調(diào)試機(jī)器的補(bǔ)償和象限的分區(qū)，建議設(shè)立實(shí)驗(yàn)對(duì)照管：

1：未染色的細(xì)胞管

2：只用 Annexin V-FITC 染色的細(xì)胞管

3：只用 PI 染色的細(xì)胞管

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