細(xì)胞轉(zhuǎn)染作為細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)常用的技術(shù)手段，在實(shí)驗(yàn)過程中，會遇到轉(zhuǎn)染效率低或者細(xì)胞毒性大，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，遇到以上細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的問題，可以試試TransIT-X2 轉(zhuǎn)染試劑。TransIT-X2 Dynamic Delivery System適用于多種細(xì)胞系，且毒性小，質(zhì)量穩(wěn)定，可以降低轉(zhuǎn)染失敗的概率，并快速得到正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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? 產(chǎn)品介紹?

TransIT-X2^?Dynamic Delivery System是一種先進(jìn)的非脂質(zhì)體聚合系統(tǒng)，可以高效轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞類型，例如A549、AsPC-1、BHK-21、BJ、BT-20、Caco-2、C2C12、CFPAC-1、CHO-K1、DI-TNC1、DU-145、HEPG2、HCC1143、HCC38、HEK293、HMEC(epithelial)、HUVEC、FreeStyleTM293-F、MDCK、NHDF、NIH-3T3、L929、LNCaP、PC-12、RAW 264.7、T47D、AU565、BxPC-3、COS-7、Hela、HCT 116、MCF-7、MDA-MB-231、PC-3等。TransIT-X2可用于DNA，siRNA等轉(zhuǎn)染。TransIT-X2轉(zhuǎn)染不需要培養(yǎng)基改變，可以在含血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行。

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? 產(chǎn)品特性???

● 在廣泛的細(xì)胞類型中具有優(yōu)良性能

●?適用于多種應(yīng)用

●?高效傳遞質(zhì)粒DNA、siRNA/miRNA和CRISPR/Cas9組分

●?TransIT-X2^?系統(tǒng)可在多種細(xì)胞類型中實(shí)現(xiàn)卓越的基因表達(dá)

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? Mirus TransIT-X2?轉(zhuǎn)染試劑常見包裝??

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? Mirus TransIT-X2^?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)??

(1)使用TransIT-X2^?Dynamic Delivery System在多細(xì)胞系和原代細(xì)胞中高效轉(zhuǎn)染GFP

采用TransIT-X2^?Dynamic Delivery System轉(zhuǎn)染EGFP質(zhì)粒DNA至A549、CHO-K1、Hep G2、MDCK、LNCaP、PC-12、原代人乳腺上皮細(xì)胞(HMEC)和正常人真皮成纖維細(xì)胞(NHDF)。在96孔板上用0.2-0.4μl的TransIT-X2^?轉(zhuǎn)染0.1μg的DNA(試劑與DNA的比例2:1、3:1或4:1)。使用Guava^??easyCyte? 5HT流式細(xì)胞儀檢測三次轉(zhuǎn)染48小時后的每個孔。

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?(2)使用TransIT-X2^?Dynamic Delivery System可視化高GFP表達(dá)

采用TransIT-X2^?Dynamic Delivery System將編碼EGFP的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到A549、CHO-K1、HepG2、LNCaP、MDCK、PC12、原代人乳腺上皮細(xì)胞(HMEC)和正常人真皮成纖維細(xì)胞(NHDF)。轉(zhuǎn)染在35mm MatTek培養(yǎng)皿中進(jìn)行，使用4-8μl的TransIT-X2^?傳遞2μg的DNA。轉(zhuǎn)染48小時后，使用Zeiss Axiovert S100倒置熒光顯微鏡捕捉圖像(32X)。

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(3)TransIT-X2^?Dynamic Delivery System優(yōu)于Lipofectamine^?試劑。

A549 (A)或MDCK (B)細(xì)胞用熒光素酶編碼質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染，使用TransIT-X2^?(Mirus Bio)，Lipofectamine^?2000 (Thermo Fisher Scientific)或Lipofectamine^?3000 (Thermo Fisher Scientific)，在指定的試劑-DNA比率或試劑- p3000?- DNA比率下轉(zhuǎn)染24小時。轉(zhuǎn)染通過熒光素酶活性測定。細(xì)胞毒性是通過定量從受損細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中釋放的LDH來評估的。與Lipofectamine^?2000或Lipofectamine^?3000的細(xì)胞相比，在最佳比例下轉(zhuǎn)染Trans - x2^?的細(xì)胞中可以觀察到更高的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和更低的細(xì)胞毒性。

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(4)TransIT-X2^?Dynamic Delivery System比Lipofectamine^?2000獲得更高的擊倒率。

TransIT-X2^?Dynamic Delivery System和Lipofectamine^?2000轉(zhuǎn)染試劑被用于轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性蛋白質(zhì)- GAPDH和AHA1的siRNA，或在正常人類真皮成纖維細(xì)胞(NHDF)中傳遞非靶向siRNA控制。根據(jù)每個制造商的協(xié)議，用4μl的Trans?IT-X2^?或6μl的Lipofectamine^?2000和25 nM的siRNA轉(zhuǎn)染在6孔板上的細(xì)胞。使用qRT-PCR相對于18s rRNA水平測量GAPDH或AHA1 mRNA的量，然后在轉(zhuǎn)染后48小時歸一化至非靶向?qū)φ战M的mRNA水平。誤差條表示三次孔的標(biāo)準(zhǔn)差。

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? 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)操作流程??

轉(zhuǎn)染流程包括培養(yǎng)細(xì)胞，制備TransIT-X2^?試劑和DNA復(fù)合物，將復(fù)合物添加到完全生長培養(yǎng)基中的細(xì)胞中，具體操作流程和相關(guān)問題解決方案可參考說明書。（https://www.mirusbio.com/products/transfection/transit-x2-dynamic-delivery-system#product:MIR%206000）

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