本文將介紹小鼠心臟組織、小鼠肝組織、小鼠脾臟腫瘤等六種ELISA小鼠樣品處理方法，如需購買相關(guān)產(chǎn)品或想要相關(guān)文獻(xiàn)，請聯(lián)系我們欣博盛生物。
1.小鼠心臟組織處理方法
● 提取緩沖液：100 mM PIPES (pH?7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制劑混合物（Sigma-Aldrich）
● 步驟：取左心室組織，在異戊烷中冷凍。將~10?mg左心室組織于2–3 ml提取緩沖液中勻漿，然后在4℃下16000g離心30分鐘。上清用于 ELISA法測定BDNF蛋白水平。單位pg /mg總蛋白。
● 參考文獻(xiàn)：Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). 'Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion.' EBioMedicine 47: 384-401.
2.小鼠肝組織處理方法
● 提取緩沖液：RIPA緩沖液（50 mM Tris–HCl，150 mM氯化鈉，1 mM EDTA，1%NP-40，1%脫氧膽酸鈉，0.1%十二烷基硫酸鈉），加蛋白酶抑制劑混合物（100×；Cell Signaling Technology，USA）
● 步驟：肝組織（50 mg）在提取緩沖液中勻漿。離心取上清，采用ELISA法檢測了IL‐25, IL‐33, IL‐1β, MMP2, MMP9, 及TIMP1的含量。
● 參考文獻(xiàn)：Loh, Z., R. L. Fitzsimmons, R. C. Reid, D. Ramnath, A. Clouston, P. K. Gupta, K. M. Irvine, E. E. Powell, K. Schroder, J. L. Stow, M. J. Sweet, D. P. Fairlie and A. Iyer (2019). 'Inhibitors of class I histone deacetylases attenuate thioacetamide-induced liver fibrosis in mice by suppressing hepatic type 2 inflammation.' Br J Pharmacol 176(19): 3775-3790.
3.小鼠脾臟腫瘤的制備方法
● 提取緩沖液：50 mM磷酸鉀，pH 7.1，0.1 M NaCl，2 mM EDTA，0.4 mM phenylmethylsulfonyl fluoride，60 μg/mL soybean trypsin inhibitor，2 μg/mL leupeptin，2 μg/mL aprotinin，2 μg/mL pepstatine
● 步驟：切除脾臟腫瘤組織，立即在液氮中冷凍并在-70 °C下儲存。冷凍組織在冰浴預(yù)冷提取緩沖液中化凍。冰浴，撕裂組織。然后4℃下，超聲處理。4℃下以100000 × g離心15分鐘去除碎片，所得上清再次在4℃下以100000 × g離心30分鐘。上清液含有胞漿蛋白，顆粒包含膜部分。
● 參考文獻(xiàn)：Yao, M., S, Kargman, E.C. Lam, C.R. Kelly, Y.X. Zheng, P. Luk, E. Kwong, J.F. Evans and M.M. Wolfe (2003) Inhibition of cyclooxygenase-2 by rofecoxib attenuates the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice. Cancer Research 63(3):586-592.
4.小鼠肺組織處理方法
● 提取緩沖液：1×磷酸鹽緩沖液（PBS）
● 步驟：左肺在1×磷酸鹽緩沖鹽水中機(jī)械破壞，經(jīng)過4次冷凍/解凍循環(huán)以打破細(xì)胞膜，然后4℃下，5000g，離心5分鐘，回收上清用于ELISA法測定Ang II 濃度。
● 參考文獻(xiàn)：Gonzalez-Tajuelo, R., M. de la Fuente-Fernandez, D. Morales-Cano, A. Munoz-Callejas, E. Gonzalez-Sanchez, J. Silvan, J. M. Serrador, S. Cadenas, B. Barreira, M. Espartero-Santos, C. Gamallo, E. F. Vicente-Rabaneda, S. Castaneda, F. Perez-Vizcaino, A. Cogolludo, L. J. Jimenez-Borreguero and A. Urzainqui (2020). 'Spontaneous Pulmonary Hypertension Associated With Systemic Sclerosis in P-Selectin Glycoprotein Ligand 1-Deficient Mice.' Arthritis Rheumatol 72(3): 477-487.
5.小鼠腎臟組織處理方法
● 提取緩沖液：0.1 M Tris-HCl （pH 7.4）
● 步驟：將0.5 g腎組織與5 ml 提取緩沖液混合。用機(jī)械攪拌器攪拌均質(zhì)。勻漿離心15分鐘（5000g）兩次。取上清用ELISA法測TNF-α和IL-1β濃度。
● 參考文獻(xiàn)： Jaremek, M., Nieradko-Iwanicka, B (2020). ' The effect of subacute poisoning with fenpropathrin on mice kidney function and the level of interleukin 1 beta and tumor necrosis factor alpha' MOLECULAR BIOLOGY REPORTS 47(6):4861-4865.
6.小鼠腦組織處理方法
方法一：
● 提取緩沖液：0.9%生理鹽水
● 步驟：麻醉小鼠，取腦組織。按每200 mg加1 ml的量加0.9%生理鹽水，機(jī)械研磨，勻漿在4℃下以12000 rpm離心10 min。取上清用于ELISA法檢測IL-1β, IL-6, 及TNF-α的含量。
● 參考文獻(xiàn)：Lai, N., D. Wu, T. Liang, P. Pan, G. Yuan, X. Li, H. Li, H. Shen, Z. Wang and G. Chen (2020). 'Systemic exosomal miR-193b-3p delivery attenuates neuroinflammation in early brain injury after subarachnoid hemorrhage in mice.' J Neuroinflammation 17(1): 74.
方法二：
● 提取緩沖液：100 mM PIPES (pH?7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制劑混合物（Sigma-Aldrich）
● 步驟：取海馬組織，在異戊烷中冷凍。將整個海馬體于2–3ml提取溶解緩沖液中勻漿，然后在4℃下16000g離心30分鐘。上清用于 ELISA法測定BDNF蛋白水平。單位pg /mg總蛋白。
● 參考文獻(xiàn)：Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). 'Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion.' EBioMedicine 47: 384-401.
方法三：
● 提取緩沖液：PBS含有蛋白酶抑制劑混合物
● 步驟：處死動物并取頭部。解剖獲取腦區(qū)（海馬體和皮質(zhì)）。并用2-甲基丁烷在干冰上快速冷凍。將大腦樣本置于含有蛋白酶抑制劑混合物的無菌PBS中，均質(zhì)。4°C，11000 rpm，離心20分鐘。取上清備用。
● 參考文獻(xiàn)：Lee, J., S.L. Chan, and M P. Mattson (2002) Adverse effect of a presenilin-1 mutation in microglia results in enhanced nitric oxide and inflammatory cytokine responses to immune challenge in the brain. Neuromolecular Medicine 2(1):29-45.
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