在免疫組化檢測過程中,許多樣本組織會產(chǎn)生可通過各種波長濾光片的組織內(nèi)源性自發(fā)熒光,干擾抗體標(biāo)記的目的蛋白熒光的觀察,甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。為了解決免疫組化實(shí)驗(yàn)中的自發(fā)熒光,VectorLabs公司專門開發(fā)了一款Vector??True VIEW? Autofluorescence Quenching?Kit試劑盒,該產(chǎn)品旨在去除組織切片中由于醛固定、紅細(xì)胞以及膠原蛋白/彈性蛋白結(jié)構(gòu)造成的自發(fā)熒光。該試劑使用方便,無需稀釋操作,為即用型試劑。
該試劑盒中含有防自發(fā)熒光效果極佳的VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 封片劑(含或不含DAPI兩種)。客戶無需單獨(dú)購買封片劑,經(jīng)濟(jì)、實(shí)用。
注意:該試劑盒對脂褐素造成的組織自發(fā)熒光無效。
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● 試劑盒組成:
Vector??TrueVIEW? Reagent A ???5 ml
Vector??TrueVIEW? Reagent B ???5 ml
Vector??TrueVIEW? Reagent C ???5 ml
VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media ???????????????2 ml
VECTASHIELD Vibrance Antifade??Mounting Media with DAPI ????2ml
其中,貨號SP-8400包含a,b,c,d四個組分;貨號SP-8500包含a,b,c,e四個組分
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●?產(chǎn)品使用方法:
| 將ReagentA、B、C以1:1:1的比例混合。(注意混合順序,先將A和B以1:1比例混合10s,再加入C,混勻10s) | |
| 將混好后的TrueView試劑滴加到組織樣本切片上,將樣本完全覆蓋,孵育2-5min | |
| 使用PBS緩沖液洗片5次,除去多余緩沖液,VECTASHIELD Vibrance Media封片后觀察 | |
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●?產(chǎn)品特征:
A 顯著降低背景染色并保留特異性抗原染色;
B 提高信噪比;
C 產(chǎn)品穩(wěn)定,儲存在滴瓶中,使用方便;
D 操作簡單,快速;整個染色過程僅需2-5min;
E 為使用者提供清晰、明確、真實(shí)的染色結(jié)果;
F 適用于多種熒光染料的自發(fā)熒光去除,包括Alexa 488, Alexa 594, DyLight 488,DyLight 594,FITC,Cyanine 5和GFP;
G SP-8500試劑盒中的封片劑中DAPI濃度較高,可對細(xì)胞核進(jìn)行清晰的染色。
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●?產(chǎn)品對自發(fā)熒光淬滅效果:
右圖為經(jīng)Vector?TrueVIEW?kit處理后,人腎臟組織切片中自發(fā)熒光淬滅的百分比與處理時間之間的關(guān)系。
Note:2分鐘內(nèi)即可達(dá)到最大淬滅效果。 | |
●?產(chǎn)品應(yīng)用舉例:
案例一
未經(jīng)任何處 | 使用Vector??TrueVIEW?處理 |
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上圖為人脾臟組織染色結(jié)果:使用VectaFluor TM Duet試劑盒(DK-8818)檢測的mouse anti-CD20(red)和rabbit anti-Ki67(green)對人脾組織切片的染色。左圖為未經(jīng)任何處理的染色結(jié)果,右圖為使用TrueVIEW?Autofluorescence Quenching試劑盒染色結(jié)果。于未經(jīng)處理的染色結(jié)果相比,經(jīng)TrueVIEW?Autofluorescence Quenching試劑盒處理后,自發(fā)熒光顯著減少。 |
案例二
| A-D圖為人腎臟切片(石蠟切片) 染色結(jié)果,實(shí)驗(yàn)中使用anti-AE1 /AE3抗體對角蛋白進(jìn)行染色(綠色)。A圖未經(jīng)處理,B-D圖經(jīng)TrueVIEW?Quencher Kit處理。自發(fā)熒光明顯減弱。延長曝光時間,陽性信號強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)。 |
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案例三
未經(jīng)任何處理 | 使用TrueVIEW Treatment Mounted? with Vibrance + 3x DAPI處理 |
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上圖為人胰腺組織染色結(jié)果:綠色為insulin的染色。左圖為未經(jīng)任何處理的染色結(jié)果,右圖為使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI(SP-8500)試劑盒染色結(jié)果。與未經(jīng)處理的染色結(jié)果相比,經(jīng)該試劑盒處理后,自發(fā)熒光顯著減少,核染色顯著增強(qiáng)。 |
案例四
未經(jīng)任何處理 | 使用TrueVIEW Treatment Mounted? with Vibrance + 4x DAPI處理 |
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上圖為人前列腺組織染色結(jié)果:紅色為上皮細(xì)胞的染色。左圖為未經(jīng)任何處理的染色結(jié)果,右圖為使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 4x DAPI(SP-8500)試劑盒染色結(jié)果。與未經(jīng)處理的染色結(jié)果相比,經(jīng)該試劑盒處理后,自發(fā)熒光顯著減少,核染色顯著增強(qiáng)。 |
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●?與市場上同類產(chǎn)品效果比較:
未經(jīng)處理(內(nèi)源性自發(fā)熒光)?? | 經(jīng)TrueVIEW?Quencher Kit處理 |
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Company A | Company B | Company C |
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Copper Sulfate Solution | Sodium Borohydride | Sudan Black B |
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●?產(chǎn)品訂購信息:
Vector??True VIEW??Autofluorescence Quenching Kit
產(chǎn)品 | 貨號 | 規(guī)格 | 染色切片數(shù) |
Vector??True VIEW? Autofluorescence Quenching Kit | SP-8400 | 15ml | 100-150 |
Vector??True VIEW? Autofluorescence Quenching Kit | SP-8500 | 15ml | 100-150 |
VECTOR TrueVIEW??Autofluorescence Quenching Kit (3ml) | SP-8403 | 3ml | ~30 |
VECTASHIELD??HardSet? Antifade Mounting Medium | H-1400 | 10 ml | 100-150 |
VECTASHIELD??HardSet? with DPI Antifade Mounting Medium | H-1500 | 10 ml | 100-150 |
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