?StressMarq商業(yè)投產(chǎn)α-突觸核蛋白寡聚體具有如下優(yōu)點:
①高含量α-突觸核蛋白寡聚體
②動態(tài)學穩(wěn)定 (kinetically stable/trapped)
③不含任何誘導劑或抑制劑 (多巴胺,EGCG)
④可用于活性電泳 (Native PAGE),體內(nèi)體外檢測及疾病建模
⑤stressmarq能夠量產(chǎn)α-突觸核蛋白寡聚體
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上圖為動態(tài)學穩(wěn)定(kinetically stable) 的α-突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 電鏡圖。該寡聚體沒有使用任何誘導劑或抑制劑來鎖定寡聚體狀態(tài),并且寡聚體含量能達到90%。
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Stressmarq的SPR-484 的負染色透射電子顯微鏡圖像在 80 Kv 下使用磷鎢酸和醋酸鈾染色在碳涂層的 400 目銅網(wǎng)格上獲得??梢郧逦目吹焦丫垠w結(jié)構,并且具有很高的均勻性。?
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動態(tài)學穩(wěn)定的α突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 可在凍融后37℃下孵育兩周仍然穩(wěn)定?
(A)凍融一次后的動態(tài)學穩(wěn)定寡聚體的Native PAGE?
(B)和(C)分別是凍融一次后的和37℃孵育兩周后的尺寸排阻色譜(SEC)
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在峰值處,90%SPR-484在凍融后37℃下孵育兩周仍然穩(wěn)定于寡聚體狀態(tài)
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動態(tài)學穩(wěn)定的α突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 對多巴胺能神經(jīng)元有毒性并且可以誘發(fā)帕金森病理現(xiàn)象(pSer129)?
(A) 經(jīng)寡聚體處理后 11 天,大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元的存活率由抗 MAP2 抗體量化并表示為對照的百分比
(B) 經(jīng)寡聚體處理后 11 天,大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元中存在的 α-突觸核蛋白 pSer129 水平通過抗 α-突觸核蛋白 pSer129 抗體與抗 MAP2 抗體的比率量化,表示為對照的百分比
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所有數(shù)據(jù)經(jīng)過統(tǒng)計學驗證,而非偶然性結(jié)果?
動態(tài)學穩(wěn)定的α突觸核蛋白寡聚體(SPR-484) 在大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元中誘導帕金森相關的pSer129病理現(xiàn)象?
(A)用對照PBS緩沖液處理后11天的大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元
(B) 用10 μg/mL SPR-484處理后11天的大鼠原代多巴胺能神經(jīng)元
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細胞核染色藍色(Hoechst),多巴胺能神經(jīng)元顯示紅色(MAP2),病理現(xiàn)象為綠色(α-syn pSer129)
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注:SPR-484為E.coli 表達的,在加入神經(jīng)元之前沒有磷酸化
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更多建模問題請見鏈接:https://www.jove.com/v/59758/generation-alpha-synuclein-preformed-fibrils-from-monomers-use
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