GeneTex 是由科學家為科學研究而創(chuàng)立，我們了解研究人員期望并要求產(chǎn)品保真度，考慮到這一點，我們將越來越多的敲除/敲弱 (KO/KD) 驗證測試納入我們的質(zhì)量保證 (QA) 標準，KO/KD 測試是我們提升“五大支柱驗證”計劃的主要方式，目的是向我們的客戶證明他們購買的 GeneTex 試劑值得他們信賴。

在特異性和性能可變性方面，人們越來越不信任市售抗體，因此，科研界要求抗體供應商加大力度，更徹底地驗證他們的產(chǎn)品，解決此問題的一種方法是通過敲除或敲弱靶蛋白。

GeneTex通過利用 CRISPR/Cas9 和 shRNA 生成的細胞裂解物進行蛋白質(zhì)印跡分析，繼續(xù)為科研界提供最高質(zhì)量和最嚴格驗證的抗體，迄今為止，我們已經(jīng)評估了我們的大部分特色產(chǎn)品，并將繼續(xù)在我們的整個抗體目錄中擴大這些努力。

2016 年 Nature 子刊建議的 5 種抗體驗證方式，即是挑選抗體的金標準。

五大驗證包含基因敲除敲弱驗證、比較抗體驗證、免疫捕獲與質(zhì)譜分析、生物特性與正交策略、蛋白過表達策略等驗證方式，說明如下：

一 基因敲除敲弱驗證

利用CRISPR/Cas9或RNAi等技術(shù)，將目標基因敲除或敲弱以驗證抗體對蛋白質(zhì)表現(xiàn)量變化的信號反饋。

敲除（Knockout）使用 CRISPR/Cas9 將目標基因從整個基因組里去除，使目標蛋白不表達，收取此 Knockout 細胞裂解液作為對照組，可確認抗體專一性。

敲弱（Knockdown）使用 siRNA 將目標基因靜默，基因還在，但蛋白表達量降低甚至不表達。收取此 Knockdown 細胞裂解液作為對照組，可確認抗體專一性。

基因敲除敲弱驗證就是取有表達蛋白的細胞裂解液，跟使用基因技術(shù)去除或減少蛋白的裂解液做比較，如果抗體專一性辨識蛋白，應該會出現(xiàn)一個樣本有強條帶，另一個樣本弱（無）條帶，如抗體無專一性則條帶無變化。

范例: Vimentin antibody [HL1506] (GTX636980)

二 比較抗體驗證

使用兩種可識別目標蛋白表面不同抗原表位的獨立抗體，并通過對比或定量分析確定特異性。相同靶標、相同處理的樣品，理論上抗體辨識的條帶位置應該相同。如不相同，可能有其一抗體辨識錯誤蛋白或是其他原因；另外也可以通過比較找到更高敏的抗體。

范例: ERK1 (phospho Thr202/Tyr204) + ERK2 (phospho Thr185/Tyr187) antibody [HL173] (GTX635617)

三 免疫捕獲及質(zhì)譜分析

利用IP/MS分析可直接定序與抗體直接發(fā)生相互作用的目標蛋白以及其所形成的蛋白質(zhì)復合物，將免疫捕獲的目標蛋白進行質(zhì)譜分析，可確認捕獲的蛋白身份是否為目標蛋白，以此確認抗體是否辨識到對的蛋白。

范例: PARP antibody [N2C1], Internal (GTX112864)

GTX112864 PARP 抗體通過免疫捕獲及質(zhì)譜分析驗證（PMID：30377371），可進行 WB、ICC/IF、IHC-P、IP、ChIP assay 等多種應用，GeneTex的“PARP antibody [N2C1], Internal”通過了五項“抗體驗證支柱”的所有測試，證實其具高質(zhì)量，高性價，與高特異性的產(chǎn)品優(yōu)勢。此外，它已在多篇文獻中被引用，在不同物種上均能進行DNA修復，基因組穩(wěn)定性和細胞凋亡方面的研究。

四 生物特性與正交策略

生物特性與正交策略是指利用目標蛋白質(zhì)本身的生物特性作為基礎進行定性與定量驗證，或使用非抗體依賴方法(例如RNA表達量)，檢測基于抗體與生物特性或非抗體定量間的相關(guān)性，來驗證抗體的專一性，包含：

1. 使用加藥測試；

2. 以特殊條件處理細胞；

3. 使用已知具有蛋白高低表達量的樣本作為陽性與陰性對照組；

4. 細胞定位；

5. 組織專一性。

6. 范例: PD-L1 antibody [HL1041] (GTX635975)

五 目標蛋白過表達

利用在細胞中過表達目標蛋白，并收取細胞裂解液后進行 WB 分析，理論上蛋白量增多，抗體辨識后的信號也會增強，因此可確認抗體是否特異性辨認正確蛋白，過表達目標蛋白可作為抗體驗證的正控制組。

范例: PAX3 antibody [HL160] (GTX635463)

問題：

Q：五項驗證要同時通過嗎?

A：五項驗證要同時通過是非常困難的，主要受限于技術(shù)與材料，大部分的抗體驗證僅能通過 1~2 項的驗證，能同時通過 5 項驗證可說是少之又少，GeneTex的GTX109669 Calnexin抗體就是少數(shù)的例子之一，該抗體通過 5 項驗證方法，并且全面驗證 WB、ICC/IF、IHC-P、IP，是目前唯一一個能同時通過 5 種驗證的Calnexin抗體。

注：【免疫捕獲及質(zhì)譜分析】驗證數(shù)據(jù)請參考 Nat Methods 期刊（PMID：30377371）

GeneTex還有 GTX628887 EGFR 抗體和GTX629744 Vimentin抗體、GTX107678 NFkB p65抗體、GTX112864、GTX112839 PARP 抗體都是少數(shù)同時通過五種驗證的例子。

挑選通過基因敲除敲弱、比較抗體、免疫捕獲及質(zhì)譜分析、生物特性與正交策略和蛋白過表達五大支柱驗證的抗體，有助于實驗不走彎路，降低失敗率，更快完成實驗。

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