近年基因組學(xué)和表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域引入了兩種新方法:
核酸酶靶向切割和釋放技術(shù)(CUT&RUN)
靶向剪切及轉(zhuǎn)座酶技術(shù)(CUT&Tag)
CUT&RUN和CUT&Tag檢測(cè)法正在取代ChIP-seq
簡(jiǎn)化的工作流程跳過(guò)了ChIP-seq實(shí)驗(yàn)法中的挑戰(zhàn)性步驟,包括染色質(zhì)片段化和抗體pull down,用更少的細(xì)胞和測(cè)序讀數(shù)得到更佳的數(shù)據(jù)。
具體變現(xiàn)為:
1.低細(xì)胞需求量;
2.高吞吐量;
3.操作流程更簡(jiǎn)易;
4.低成本,測(cè)序讀取次數(shù)更少;
5.數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠,重復(fù)性好
EpiCypher CUT&Tag:
孵育結(jié)合好特異性抗體與靶標(biāo)蛋白后,加入蛋白 A、蛋白G與Tn5的復(fù)合物(pAG-Tn5),使得轉(zhuǎn)座體進(jìn)入細(xì)胞并與抗體結(jié)合,間接地固定在靶蛋白上;激活Tn5酶的切割活性,將靶蛋白結(jié)合的DNA區(qū)域切斷,從而達(dá)到提取DNA、進(jìn)行PCR擴(kuò)增、構(gòu)建文庫(kù)的目的。在Tn5上融合了protein A/G抗體結(jié)合功能域的轉(zhuǎn)座體pAG-Tn5是關(guān)鍵的進(jìn)步,因?yàn)檫@一步允許研究者不必碎裂染色質(zhì)以及進(jìn)行傳統(tǒng)的庫(kù)準(zhǔn)備步驟。
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