1.要測誰?
確認(rèn)目標(biāo)蛋白特性
2.誰去測?
抗體種類
a.單克隆:專一性高,靈敏度較多克隆低
b.多克隆:靈敏度高,批次差異較大
c.重組抗體:批次差異小
抗體驗(yàn)證
3.被誰測?
一抗二抗配對(duì)
a.兔配兔,鼠配鼠,一抗二抗想配不出錯(cuò)
b.做免疫組化如一抗宿主種屬和樣本種屬來源相同時(shí),需要注意樣本內(nèi)源性IgG是否與二抗結(jié)合產(chǎn)生假陽性
呈色方式
a.HRP,AP呈色
b.熒光(多染時(shí)抗體種屬或亞型不相同,使用的熒光波長不相近)
二抗專一性
a.使用交叉預(yù)吸附型二抗提高抗體專一性
4.在哪測?
做什么應(yīng)用,用什么抗體
a.環(huán)境不同,依應(yīng)用挑抗體
b.做IP實(shí)驗(yàn)時(shí),挑選EasyBlot二抗,去除重輕鏈干擾
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