免疫反應(yīng)是由固有免疫細(xì)胞與適應(yīng)性免疫細(xì)胞互相作用而形成的復(fù)雜反應(yīng),單獨(dú)的抗體反應(yīng)或者B細(xì)胞反應(yīng)無法全面展現(xiàn)這個(gè)復(fù)雜的過程。
抗體滴度能否作為抵御SARS-CoV-2的保護(hù)性免疫指標(biāo)目前還存在爭(zhēng)議。由輔助T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫在保護(hù)性免疫中起重要作用,同時(shí),T細(xì)胞可起到免疫檢測(cè)的作用。
我們使用FluroSpot對(duì)7名COVID-19恢復(fù)期患者進(jìn)行了研究。使用FluroSpot檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌具有很高的靈敏度,與流式細(xì)胞術(shù)相比,靈敏度可提高幾百倍。FluroSpot還可以用于直接檢測(cè)再次接受病毒多肽刺激時(shí)細(xì)胞因子的分泌情況。我們選擇分析患者的IL-2和IFN-γ兩個(gè)細(xì)胞因子來全面的評(píng)估T細(xì)胞對(duì)病毒感染的應(yīng)答?(Chauvat et al, Hum Vaccin Immunother, 2014)。同時(shí),我們使用自制的SARS-CoV-2 ELISA試劑盒來考察患者的抗體水平,并將兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。
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方法:
研究用血液來源于7名經(jīng)PCR確診患有輕中癥SARS-CoV-2的恢復(fù)期患者。提取患者捐獻(xiàn)血液樣本的PBMC(外周血單核細(xì)胞),分別使用SARS-COV-2 peptide pool?和T cell specific peptide pools(陰性對(duì)照)進(jìn)行刺激。在Mabtech IRISTM上使用Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpotPLUS?kit(250,000 cells/well)分析T細(xì)胞應(yīng)答。同時(shí),使用自制的SARS-CoV-2 ELISA試劑盒檢測(cè)SARS-CoV-2?Spike RBD?特異性抗體。
結(jié)果:
所有的COVID-19恢復(fù)期患者在經(jīng)過SARS-COV-2多肽刺激后均出現(xiàn)Th1型免疫反應(yīng)。6名患者的SARS-CoV-2特異性抗體水平高于臨界值,另一名患者(C7)的抗體水平低于臨界值但是IFN-γ/IL-2反應(yīng)性最強(qiáng)。
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結(jié)論:
在本研究中,抗體滴度與T細(xì)胞反應(yīng)似乎呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)。C4、C5、C7三位患者的抗體反應(yīng)最弱,但是T細(xì)胞反應(yīng)卻最強(qiáng),即使用FluoroSpot可獲得的能夠分泌IFN-γ/IL-2的細(xì)胞數(shù)最多。基于現(xiàn)有有限的研究我們不能得出兩者具有顯著的相關(guān)性。我們沒有獲得疾病嚴(yán)重程度相關(guān)的數(shù)據(jù)。但是這些數(shù)據(jù)提出了T細(xì)胞與B細(xì)胞在COVID-19疾病中的相互作用這一個(gè)重要課題。
Ni et al (Immunity, 2020) 發(fā)現(xiàn)中和抗體滴度與病毒特異性T細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)正相關(guān),與我們的結(jié)果相反。這可能是由兩項(xiàng)研究的檢測(cè)樣本有限和疾病嚴(yán)重程度不同而造成的。然而,在這項(xiàng)研究中,一位康復(fù)期患者的抗體水平較低不能被檢測(cè)到,但是使用我們的Human IFN-γ ELISpotPLUS kit (ALP)產(chǎn)品卻能夠證實(shí)T細(xì)胞對(duì)病毒產(chǎn)生反應(yīng)。
如上所述,我們分享了一些初期的研究數(shù)據(jù)。目前,我們與Cecil Czerkinsky (INSERM, CNRS, Université de la C?te d'Azur)等合作,共同進(jìn)行類似的和更大規(guī)模的研究,以評(píng)估以上研究發(fā)現(xiàn)對(duì)COVID-19診斷和預(yù)后的價(jià)值。
我們剛剛發(fā)布了SARS-CoV-2 S1 S2 N defined peptide pool,可用于定量檢測(cè)能夠分泌SARS-CoV-2 S和N蛋白特異性細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)。這個(gè)產(chǎn)品已經(jīng)使用FluoroSpot和ELISpot對(duì)經(jīng)PCR確認(rèn)為SARS-CoV-2陽性的COVID-19恢復(fù)期患者的PBMC進(jìn)行了驗(yàn)證。我們根據(jù)Ahmed et al. (Viruses) 2020,選擇SARS-1和SARS-2共同的表位來構(gòu)建肽庫。肽庫包含了41種多肽(31種MHC-I多肽,10種MHC-II多肽,每種25 μg),是S蛋白(S1 domain和S2 domain)和N蛋白的合成多肽。
相關(guān)產(chǎn)品信息
產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
FSP-0102 | Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpotPLUS?kit |
3420-4APT | Human IFN-γ ELISpotPLUS?kit (ALP) |
3619-1 | CMV peptide pool for human CD4 and CD8 T cells |
3618-1 | CEF extended peptide pool for human CD8 T cells |
3617-1 | CEFTA peptide pool for human CD4 T cells |
3620-1 | SARS-CoV-2 S1 S2 N defined peptide pool |
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