DC 是“Dendritic Cells”的縮寫，中文全稱為“樹突狀細(xì)胞”，因其成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。DC 是由2011 年諾貝爾獎(jiǎng)獲得者、加拿大籍科學(xué)家Ralph M. Steinman 于1973 年發(fā)現(xiàn)的，是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(Antigen Presenting Cells, APC)。已證實(shí)，DC 是唯一能夠顯著刺激初始T 細(xì)胞(Na?ve T cells)增殖的APC，而其它種類的APC(如單核巨噬細(xì)胞，B 細(xì)胞等)僅能刺激已活化的或記憶性的T 細(xì)胞，因此DC 是機(jī)體適應(yīng)性T 細(xì)胞免疫應(yīng)答的始動(dòng)者，在腫瘤免疫中發(fā)揮著極其重要的作用。

【培養(yǎng)原理】

因?yàn)?DC 需從其它種類細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來，且可分為不同的成熟階段，所以通常分為2個(gè)步驟進(jìn)行培養(yǎng)：

Step 1：從DC 的祖細(xì)胞(如單核細(xì)胞)誘導(dǎo)分化為未成熟DC (immature DC，iDC)；

Step 2：從iDC 誘導(dǎo)分化為成熟DC (mature DC，mDC)。

Step 1 需要試劑：

GM-CSF 和IL-4 共同作用可使單核細(xì)胞定向分化為未成熟DC，此時(shí)的DC 具有較強(qiáng)的抗原攝取和加工能力，但抗原遞呈能力很弱。細(xì)胞表面中度表達(dá)MHC I 類、II 類分子和B7 家族分子(CD80, CD86 等)，但不表達(dá)或低表達(dá)CD14。

GM-CSF(粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子)：

GM-CSF 是最早被鑒定出對(duì)DC 培養(yǎng)有作用的細(xì)胞因子之一，在DC 培養(yǎng)中的功能是促進(jìn)單核細(xì)胞向大巨噬樣細(xì)胞分化，細(xì)胞表面MHC II 類分子的表達(dá)得以提高，從而增強(qiáng)細(xì)胞的抗原遞呈功能。此外，GM-CSF 也可促進(jìn)DC 的存活。

IL-4 (白細(xì)胞介素-4)

IL-4 在由單核細(xì)胞誘導(dǎo)成DC 的過程中發(fā)揮的作用是抑制巨噬細(xì)胞的過度生長(zhǎng)，從而引導(dǎo)單核細(xì)胞向DC 方向分化。若培養(yǎng)體系中不加IL-4，單核細(xì)胞將分化為巨噬細(xì)胞。同時(shí)，IL-4 還有降低細(xì)胞表面表達(dá)CD14 分子的能力。CD14 表達(dá)水平的降低是單核細(xì)胞分化為DC 的重要標(biāo)志。

Step 2?需要試劑：

TNF-a/IL-1b/ IL-6 (腫瘤壞死因子-a/白細(xì)胞介素-1b/白細(xì)胞介素-6)

TNF-a，IL-1b和IL-6 均為促炎癥因子，在感染局部和腫瘤部位被誘導(dǎo)產(chǎn)生。體外研究表明，這3 種細(xì)胞因子均可下調(diào)未成熟DC 的巨胞飲作用和表面Fc 受體的表達(dá)，使細(xì)胞內(nèi)MHC II 類分子區(qū)室(class II compartment)消失，但能夠上調(diào)細(xì)胞表面MHC I 類、II 類分子和B7 家族分子(CD80, CD86 等)的表達(dá)， 使未成熟DC 分化為成熟DC，此時(shí)DC 的抗原攝取和加工能力明顯減弱，而抗原遞呈能力顯著增強(qiáng)，可極強(qiáng)地激活T細(xì)胞。TNF-a/IL-1b/IL-6 三因子組合可在無牛血清培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)DC 的完全成熟，從而制備出可以應(yīng)用于臨床的DC。

PGE2 (prostaglandin E2，前列腺素E2)

PGE2 也是炎性介質(zhì)，可由TNF-a，IL-1 和LPS(脂多糖)等炎癥信號(hào)誘導(dǎo)產(chǎn)生。在TNF-a/IL-1b/IL-6 成熟誘導(dǎo)組合中添加PGE2，可進(jìn)一步提高DC 的產(chǎn)量、成熟度、遷移能力和免疫激活能力。這里尤為重要的是DC 遷移能力的提高。因?yàn)門NF-a/IL-1b/IL-6 誘導(dǎo)成熟的DC 遷移能力較弱，不能很好地到達(dá)淋巴結(jié)而激活T 細(xì)胞。而添加PGE2 后誘導(dǎo)成熟的DC 因表面趨化因子受體的高表達(dá)，而更容易遷移至淋巴結(jié)，而引起機(jī)體對(duì)抗腫瘤的免疫反應(yīng)。因此，TNF-a/IL-1b/IL-6/PGE2 組合(見下表)廣泛應(yīng)用于臨床，并被認(rèn)為是制備成熟DC 的“金標(biāo)準(zhǔn)”

組份?的工作濃度

TNF-a ?10ng/ml? ?IL-1b ???10ng/ml ??IL-6? ?1000 U/ml ??PGE2? 1mg/ml

【DC?培養(yǎng)試劑推薦】

注：Animal Free 意為無動(dòng)物成分。無動(dòng)物成分的重組細(xì)胞因子在生產(chǎn)過程中不會(huì)有任何動(dòng)物源性物質(zhì)，尤其是牛的病原體和蛋白的混入，使得最終獲得的重組人蛋白中不含任何動(dòng)物成分。這樣可避免動(dòng)物病原體(如瘋牛病，克雅氏病等)的污染及外源蛋白引起的機(jī)體異種排斥和過敏反應(yīng)，因此細(xì)胞治療的體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中最好使用無動(dòng)物成分的重組細(xì)胞因子。

【DC?鑒定試劑推薦】

注：用于DC 鑒定的表面標(biāo)志物的表達(dá)在流式圖上均呈現(xiàn)單個(gè)峰，且多數(shù)情況下不能與陰性峰完全區(qū)分開來。為避免多色分析時(shí)補(bǔ)償調(diào)節(jié)不好導(dǎo)致結(jié)果的不準(zhǔn)確性，建議最好用單標(biāo)，最多用雙標(biāo)來做DC 表面標(biāo)志的分析，而且必須使用同型對(duì)照，而非空白細(xì)胞對(duì)照來排除背景染色。

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