每個(gè)Vectorlabs的HRP Antibody All-in-One Conjugation Kit提供了抗體標(biāo)記HRP所需的所有必要成分。該試劑盒需要用戶提供100ug的抗體。這種獨(dú)特試劑盒的成分包括一個(gè)預(yù)激活的高活性辣根過(guò)氧化物酶(> 250U/mg)和一個(gè)新型的Q旋濾器，以高產(chǎn)純化產(chǎn)物。不含殘留抗體和辣根過(guò)氧化物酶，因此在您的檢測(cè)中提供最大的信噪比。任何適當(dāng)純化的單克隆或多克隆抗體(無(wú)論IgG亞類如何)都可以在5小時(shí)內(nèi)(約1小時(shí)動(dòng)手操作)結(jié)合和純化。
All‐in‐OneTM?conjugation kits是基于Solulink的HydraLinkTM化學(xué)。這種化學(xué)反應(yīng)包括芳香肼與芳香醛反應(yīng)形成穩(wěn)定的腙鍵。HydraLinKTM結(jié)合非常有效，可以將100%的抗體轉(zhuǎn)化為結(jié)合物形式。苯胺提高了溫和反應(yīng)條件下共軛物形成的速率和效率；導(dǎo)致游離抗體定量轉(zhuǎn)化為辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物。
圖1. HRP Antibody All‐in‐OneTM?試劑盒標(biāo)記原理
抗體完全轉(zhuǎn)化為HRP綴合物大大簡(jiǎn)化了下游純化。純化包括選擇性地將綴合物結(jié)合到一種新型的Q旋濾膜上，該濾膜允許過(guò)量的辣根過(guò)氧化物酶自由流動(dòng)。自旋過(guò)濾器提供高純度而不犧牲共軛產(chǎn)率。用All‐in‐OneTM?kit標(biāo)記上的綴合物可與所有下游分析實(shí)驗(yàn)兼容，如WB、ELISAs或IHC等。每個(gè)試劑盒提供足夠的試劑來(lái)進(jìn)行2個(gè)偶聯(lián)反應(yīng)；每個(gè)產(chǎn)生50‐70 ug高純度HRP標(biāo)記的抗體綴合物。
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圖2. HRP Antibody All‐in‐OneTM?試劑盒標(biāo)記過(guò)程
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