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Jackson精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies

2023-10-09
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Jackson精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies


Jackson?lmmunoResearch推出一系列適用于診斷試劑研發(fā)的Mouse Monoclonal Anti-Human IgE antibodies(小鼠抗人IgE單克隆抗體),補(bǔ)充了Jackson現(xiàn)有的抗人lgG、IgM和lgA抗體產(chǎn)品,抗人IgE可與一系列特定的報(bào)告分子偶聯(lián)(如堿性磷酸酶和生物素),使其具有極強(qiáng)的靈敏度。

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Jackson?ImmunResearch Anti-Human IgE

Jackson ImmunoResearch可提供兩個(gè)不同克隆號(hào)(ME.114和ME.10A10)的抗人IgE抗體,均為小鼠來(lái)源的單克隆抗體,與人lgE反應(yīng),并且是ε鏈特異的。

小鼠抗人IgE(Clone: ME.114, Cat#209-002-241)可與一系列報(bào)告分子偶聯(lián),并可在多種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中檢測(cè)人IgE,如ELISA、側(cè)向免疫層析、流式細(xì)胞術(shù)、WB和化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)。

小鼠抗人IgE(Clone: ME.10A10,Cat#209-002-244)是未標(biāo)記的純化抗體,在夾心法檢測(cè)中可作為捕獲抗體與標(biāo)記的抗人IgE抗體(Clone: ME.114)配對(duì)使用。

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產(chǎn)品信息

標(biāo)記類(lèi)型

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號(hào)

規(guī)格

Unconjugated

IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-002-241

0.1 mg

IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (10A10)

209-002-244

0.1 mg

Horseradish Peroxidase

Peroxidase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-032-241

0.5 ml

Alkaline Phosphatase

Alkaline Phosphatase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-052-241

0.5 ml

Biotin-SP (long spacer)

Biotin-SP (long spacer) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-062-241

0.25 ml

Fluorescein (FITC)

Fluorescein (FITC) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-092-241

0.25 mg

R-Phycoerythrin

R-Phycoerythrin IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-112-241

0.1 ml

40 nm Colloidal Gold

40 nm Colloidal Gold IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-402-241

1 ml

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特異性

Jackson ImmunoResearch抗人IgE?ε鏈特異性抗體已通過(guò)ELISA測(cè)試,結(jié)果顯示該抗體對(duì)人IgG、IgM或IgA具有最小的交叉反應(yīng)性。圖1為驗(yàn)證抗人IgE抗體(Clone: ME.114和ME.10A10)特異性的WB結(jié)果圖,結(jié)果顯示未檢測(cè)到其他類(lèi)型的免疫球蛋白信號(hào)。Jackson未測(cè)試是否可以檢測(cè)到其他物種的免疫球蛋白。

Jackson精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies?

圖1.?

A.?直接蛋白印跡顯示Anti-Human IgE antibody(ME.114)對(duì)人IgE的特異性。每孔分別上樣2ug純化的人免疫球蛋白(IgE、IgG、IgA和IgM)。SDS-PAGE在非還原條件下進(jìn)行,并將蛋白質(zhì)印跡到硝化纖維素膜上。用含5%BSA的PBS/T封閉,并用HRP標(biāo)記的Anti-Human IgE(Cat#209-032-241)以1:10000稀釋孵育,使用ECL顯色。

B. 間接蛋白印跡顯示Anti-Human IgE antibody (10A10)抗人IgE(Clone: ME.10A10)對(duì)人IgE的特異性。每孔分別上樣250ng純化的人免疫球蛋白(IgE、IgG、IgA和IgM)。SDS-PAGE在非還原條件下進(jìn)行,并將蛋白質(zhì)印跡到硝化纖維素膜上。用含5%BSA的PBS/T封閉,2ug/mL的Anti-Human IgE(Cat#209-002-244)孵育。PBS/T洗滌后,用HRP標(biāo)記的抗小鼠IgG(Cat#715-035-150)以1:10000稀釋孵育,使用ECL顯色。


Jackson精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies

圖2.?

A. 在還原和非還原條件下使用Anti-Human IgE (clone number ME.114)檢測(cè)100ng純化人IgE的WB結(jié)果。

B. 在還原和非還原條件下使用Anti-Human IgE (clone number 10A10)檢測(cè)100ng純化人IgE的WB結(jié)果。

注:抗人IgE(Clone: ME.114)和抗人IgE(Clone: ME.10A10)對(duì)還原IgE表現(xiàn)出較弱的信號(hào),因此不建議兩者用于檢測(cè)還原IgE。


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靈敏度

Jackson ImmunoResearch抗人IgE抗體檢測(cè)各種來(lái)源的人IgE均具有優(yōu)異的靈敏度。圖3展示了Anti-Human IgE (clone number ME.114)在間接ELISA中檢測(cè)兩種不同濃度IgE包被板的靈敏度。圖4展示了Anti-Human IgE(Clone: ME.114)在間接ELISA中檢測(cè)不同骨髓瘤和血漿來(lái)源純化IgE的靈敏度。

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Jackson精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies

圖3:間接法ELISA檢測(cè)人IgE。每孔加入100ul含2或0.2ug/ml的人血漿中純化的IgE的碳酸鹽包被緩沖液進(jìn)行包被,4℃過(guò)夜。每孔加入300ul含1%BSA(Cat#001-000-161,不含IgG、蛋白酶)的PBS/T封閉2小時(shí)。用PBS/T將一抗Anti-Human IgE(Cat#209-002-244)以1:3在板上連續(xù)稀釋?zhuān)⒃谑覝叵路跤?小時(shí)。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)(Cat#115-035-071),用PBS/T中以1:20000稀釋?zhuān)跤?.5小時(shí)。加入TMB 30分鐘后在620nm處讀數(shù)。

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圖4:間接法ELISA檢測(cè)不同來(lái)源的人IgE。每孔加入100ul含2ug/ml純化人IgE的碳酸鹽包被緩沖液進(jìn)行包被,4℃過(guò)夜。每孔加入300ul含1%BSA(Cat#001-000-161)的PBS/T在室溫下封閉2小時(shí)。用PBS/T將一抗Anti-Human IgE(Cat#209-002-241)以1:3在板上連續(xù)稀釋?zhuān)⒃谑覝叵路跤?小時(shí)。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)(Cat#115-035-071)以1:20000稀釋?zhuān)跤?.5小時(shí)。加入TMB 30分鐘后在620nm處讀數(shù)。?

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檢測(cè)血漿中IgE

Jackson ImmunoResearch抗人IgE與其配對(duì)的捕獲抗體配合用于夾心法ELISA時(shí)具有極好的靈敏度。兩種不同的單克隆抗體可以配對(duì)使用以進(jìn)行捕獲和檢測(cè)。在這種情況下,用牛血清白蛋白(Cat#001-000-161,不含IgG與蛋白酶)封閉前,使用未標(biāo)記的Anti-Human IgE(Clone: ME.10A10,Cat#209-002-244)作為包被抗體,洗滌后,與稀釋后的樣品一起孵育。選擇標(biāo)記的Anti-Human IgE antibody,例如Alkaline Phosphatase Anti-Human IgE (Cat#209-052-241),或者Peroxidase Anti-Human IgE (Cat#209-032-241),接著使用合適的底物或顯色技術(shù)。圖5展示了直接夾心法ELISA驗(yàn)證非偶聯(lián)的抗人IgE與堿性磷酸酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體搭配使用來(lái)定量檢測(cè)患者樣本中的總IgE。本實(shí)驗(yàn)中使用樣本的總IgE(kIU/l)已通過(guò)羅氏Cobas Total IgE assay檢測(cè)(結(jié)果詳見(jiàn)圖5的X軸)。

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圖5. 直接夾心法ELISA檢測(cè)人血清和血漿樣品中的總IgE。用2ug/ml未標(biāo)記的Anti-Human IgE(Clone: ME.10A10,Cat#209-002-244)包板,100μl/孔,4℃過(guò)夜。每孔加入300ul含1%BSA(Cat#001-000-161)的PBS/T(0.05%吐溫)封閉1.5小時(shí),隨后加入用PBS/T以1:80稀釋的樣品孵育1小時(shí),100ul/孔。檢測(cè)抗體,堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗人IgE(Cat#209-055-241),用PBS/T中以1:10000稀釋?zhuān)?00ul/孔孵育1小時(shí)。每孔加入100ul 新鮮配制的DEA底物孵育30分鐘,在405nm處讀數(shù)。

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推薦稀釋倍數(shù)

下表中的建議稀釋倍數(shù)用范圍表示,因?yàn)樽罴训南♂尪扰c許多因素有關(guān),如抗原密度,滲透性等。使用者應(yīng)根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定抗體最佳的工作濃度。

Conjugate

ELISA

Weatern Blot*

Flow Cytometry

Uncojugated


10-20 ug/ml


FITC


1:50—1:200


R-PE



1:50—1:200

Horseradish Peroxidase

1:5,000—1:100,000

1:5,000—1:100,000 (non-ECL)

1:10,000—1:200,000 (ECL)


Alkaline Phosphatase

1:5,000—1:50,000

1:5,000—1:50,000


Biotin-SP(using Fluorphore-Conjugates Streptavidin)



1:200—1:1,000

Biotin-SP(using enzyme-Conjugates Streptavidin)

1:20,000—1:400,000

1:20,000—1:400,000


*請(qǐng)注意,當(dāng)檢測(cè)還原性蛋白質(zhì)時(shí),該抗體將給出較弱的信號(hào),因此不建議用于需要通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)還原IgE的應(yīng)用。

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參考文獻(xiàn)

1.?Cox, L., Larenas-Linnemann, D., Lockey, R. and Passalacqua, G., 2010. Speaking the same language: The World Allergy Organization Subcutaneous Immunotherapy Systemic Reaction Grading System. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(3), pp.569-574.e7.

2.?Pawankar, R., Canonica, G., Holgate, S., and Lockey, R., 2011. World Allergy Organization (WAO) white book on allergy. United Kingdom: WAO.

3.?Sánchez-Borges, M., Ansotegui, I. & Cox, L. World Allergy Organization Grading System for Systemic Allergic Reactions: it Is Time to Speak the Same Language When it Comes to Allergic Reactions. Curr Treat Options Allergy 6, 388–395 (2019). https://doi.org/10.1007/s40521-019-00229-8.




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